ИСТИНА

Во всех живых организмах существует система репарации неканонических пар нуклеотидов («мисматчей»), получившая название MMR (mismatch repair system). Нарушение функционирования MMR на одном из этапов репарации приводит к накоплению мутаций в клетке и снижает ее жизнеспособность. Считается, что в большинстве бактерий после узнавания «мисматча» белком MutS репарацию инициирует белок MutL. Он может вносить одноцепочечный разрыв в дочернюю цепь ДНК. Такие белки MutL, содержащие эндонуклеазный домен, на данный момент выделены только из шести бактерий, в том числе из Neisseria gonorrhoeae и Rhodobacter sphaeroides. Бактерия N. gonorrhoeae является патогенной для человека, изучение ее системы MMR является актуальной задачей с точки зрения направленного поиска лекарственных препаратов. Интерес к бактерии R. sphaeroides вызван ее изменчивостью в процессе метаболизма и выживаемостью в различных условиях, что также может быть связано с особенностями функционирования системы MMR. В данной работе оптимизированы методики выделения белков MutL из R. sphaeroides (RspL) и N. gonorrhoeae (NgoL). Продемонстрирована способность RspL и NgoL гидролизовать плазмидные ДНК, показано влияние различных металлов на эндонуклеазную функцию белков. Также продемонстрирована АТФазная активность полученных белков и определены константы скорости реакции гидролиза АТФ. Проверена способность белков связывать одно- и двуцепочечные линейные фрагменты ДНК различной длины. Показано, что минимальная длина, необходимая для формирования комплексов RspL и NgoL с ДНК составляет около 30 пар нуклеотидов. Исследовано влияние тринуклеотидных повторов GGT и тетрануклеотидных повторов GGGT в ДНК на гидролиз белком MutL.