ИСТИНА

Известно, что одной из причин потери активности DAAO при повышенных температурах является диссоциация кофактора FAD из активного центра. Введение замен, улучшающих связывание кофактора белковой глобулой, может привести к увеличению температурной стабильности фермента. Выравнивание аминокислотных последовательностей DAAO из различных источников и подробный анализ трехмерной структуры фермента позволили выявить перспективные аминокислотные остатки для замены. Мутации в ген фермента были введены с помощью направленного мутагенеза. Мутантные формы TvDAAO были экспрессированы в клетках E.coli по методике, разработанной в нашей лаборатории. Изучение свойств полученных мутантных форм TvDAAO показало, что выполненные аминокислотные замены привели к изменению профиля субстратной специфичности и изменению температурной стабильности фермента. В ряде случаев наблюдается увеличение температурной стабильности и улучшение каталитических свойств с некоторыми D-аминокислотами.