ИСТИНА

Микотоксинами, продуцентами микроскопических плесневых грибов могут быть загрязнены почвы, а также зерновые культуры, выращенные на загрязненных почвах. В настоящее время нет эффективных химических способов борьбы с загрязнением почв, злаковых культур (растительного материала) микотоксинами. Своими канцерогенными, эстрогенными и тератогенными свойствами и широкой распространенностью выделяется афлатоксин В1 (AФ B1) и охратоксин A (ОТА). АФ В1 – вторичный метаболит плесневых грибов рода Aspergillus, широко распространенные в матрицах зерновых и масличных культур, орехах (арахис и т.д.) и сухофруктах. ОТА – микотоксин группы охратоксинов, синтезируемый грибами рода Aspergillus и Penicillium, которым наиболее часто загрязняются крупы и зерновые продукты, хлеб, вино, сушеный виноград, кофе. ОТА оказывает нефротоксическое, тератогенное, иммунодепрессивное воздействие. Поэтому обоснован интерес исследователей к разработке экспрессных, высокоспецифичных, чувствительных, методов анализа определения микотоксинов. При определении AФB1 и ОТА был использован вариант гомогенного конкурентного поляризационно-флуоресцентного иммуноанализа (ПФИА), в основе которого лежит конкурентная реакция между трейсером и искомым веществом за ограниченное число центров связывания специфических антител. При разработке методики ПФИА AФB1 в качестве метки использовали этилендиаминтиокарбомоилфлуоресцеин (трейсер), для ОТА - аминометилфлуоресцеин (трейсер), которые оказались одними из наиболее чувствительных для определения этих микотоксинов. Были определены разведения трейсера и антител, обеспечивающие максимальное значение аналитического сигнала. По результатам значений величины поляризации флуоресценции оптимальное разведение трейсера составило 1:640000, разведение Aт – 1:107 М в случае АФB1 и разведение трейсера 1:250000 М, разведение Ат 1: 106 М в случае ОТА. Подобрано оптимальное время инкубации иммунного комплекса трейсера с антителами, которое составило 5 мин. Линейный диапазон определяемых концентраций АФВ1 для разработанной методики составил от 5×10-6 – 5×10-9 М для ОТА - 1×10-6 – 1×10-10 М. На примере афлатоксина В1 оценен процент перекрестных реакций по отношению к АФМ1 (80 %) и ОТА (11%). Пробоподготовка образцов включала экстракцию определяемого компонента метанольным раствором с последующим центрифугированием. Большинство возбудителей болезней растений (АФВ1, ОТА и др.) обитают в почве (сохраняясь там 5 – 15 лет), поражая корневую систему, стебли, листья, колосья, зерно. Поэтому разработанная методика для определения этих микотоксинов апробирована в анализе различных почв (кислые и нейтральные), пищевых продуктов (в частности орехах: арахис, кешью) для АФВ1 и кукурузной, ячневой крупах, кукурузных хлебцах и муке, детском питании для ОТА. Разработанные приемы позволили определять микотоксины на уровне и ниже ПДК с Sr не более 0.073.