ИСТИНА

В настоящее время активно развивается рынок фармацевтической продукции. В связи с этим увеличивается загрязненность объектов окружающей среды (появилось понятие - фармацевтическое загрязнение природных вод). Лекарственное средство или его метаболиты выводятся из организма с калом и мочой и через канализацию попадают в водоемы и почву. Установлено, что диклофенак (ДФ) – нестероидное противовоспалительное лекарственное средство, попавшее в водоем, токсично для рыб, нарушает работу их почек. Один из современных подходов к оценке загрязненности природных вод, анализу лекарственных соединений, выявлению фальсифицированной продукции заключается в комбинированном использовании комплекса методов, которые обеспечивают необходимую чувствительность, селективность и точность определений токсичных веществ, что показано нами на примере использовании биосенсоров, поляризационного флуоресцентного иммуноанализа (ПФИА) и проточно – инжекционного (ПИА) методов анализа при определении ДФ. Изучение действия диклофенака на иммобилизованную тирозиназу, входящую в состав биочувствительной части амперометрического биосенсора на основе печатных платиновых электродов показало, что в его присутствии наблюдается уменьшение величины аналитического сигнала, т.е. этот препарат оказывает ингибирующее действие в диапазоне концентраций 110-6 - 110-9 М. Максимальная степень (процент) ингибирования при действии на фермент – субстратную систему фенол – тирозиназа составляет для диклофенака 70.01,2 % в изученной области концентраций. Использование в составе сенсоров наноструктурированных материалов: фуллерена С60, углеродных нанотрубок (УНТ), наночастиц золота (НЧ Au) и нанокомпозитов на их основе: С60/НЧ Au, УНТ/НЧ Au позволило расширить диапазон определяемых концентраций до 110-11 М и увеличить максимальную степень ингибирования до 82.00.9 % (С60 / НЧ Au) и до 86.02.0 % (УНТ/НЧ Au). Вариант гомогенного конкурентного ПФИА (конкурентное связывание искомого вещества и трейсера - аналита, меченного флуоресцентной меткой) с ограниченным числом центров связывания специфических антител (Ат) был использован в качестве одного из альтернативных методов определения ДФ. Оптимальное разведение трейсера 1:2×104, концентрация Aт – 5×10-4 мг/мл, время инкубации иммунного комплекса: трейсер - Ат 6 мин. Линейный диапазон градуировочной зависимости наблюдался в области концентраций 1×10-5 – 1×10-9 М. Использование тирозиназного биосенсора для определения ДФ методом ПИА показало, что в оптимальных условиях линейный диапазон градуировочной зависимости аналитического сигнала (потенциал регистрации 0.6 В) от концентрации наблюдался в области 1×10-6 – 1×10-9 М при скорости потока 0.25 мкл/с. Показана возможность применения разработанных вариантов определения ДФ в модельных растворах морских и на фоне речных вод с Sr не более 0.075. Сочетание рассмотренных подходов к определению ДФ позволяет получить точные и надежные результаты для оценки загрязненности природных объектов.