ИСТИНА

Кураксин (CBL0137) является перспективным производным карбазола, обладающим высокой противоопухолевой активностью и низкой токсичностью к здоровым клеткам [1]. Он способен интеркалировать в ДНК в AT-богатых участках. Ранее мы показали, что интеркалирующие лиганды способны ингибировать эукариотическую ДНК-метилтрансферазу (МТазу) Dnmt3a, осуществляющую de novo метилирование ДНК по 5 положению цитозина-мишени в CpG-участках [2]. Метилирование ДНК является важной формой эпигенетической регуляции и контролирует многие клеточные процессы. В данной работе исследовалось влияние CBL0137 на функционирование Dnmt3a как один из возможных аспектов его противоопухолевого действия. Мы исследовали связывание кураксина с 30-звенным ДНК-дуплексом, меченным 6-карбоксифлуоресцеином и содержащим один CpG-сайт (f-ДНК), а также комплексообразование каталитического домена Dnmt3a (Dnmt3a-CD) с f-ДНК в присутствии CBL0137. Было обнаружено взаимодействие CBL0137 с f-ДНК по увеличению поляризации флуоресценции f-ДНК при введении в анализируемую смесь CBL0137 (λвозб 495 нм, CBL0137 в этой области прозрачен). Константа диссоциации (KD) комплекса f-ДНК-CBL0137 составила 13±4 мкМ. Используя разработанный нами ранее метод определения эффективности метилирования ДНК in vitro [3], мы показали ингибирование реакции метилирования f-ДНК в присутствии CBL0137 с константой IC50, равной 14±3 мкМ. По предварительным данным, CBL0137 затрудняет образование комплекса f-ДНК с Dnmt3a-CD: KD фермент-субстратного комплекса составляла 80±9 нМ в отсутствие CBL0137 и >300 нМ при добавлении в раеакционную смесь 30 мкМ CBL0137. Результаты данной работы свидетельствуют о возможном эпигенетическом вкладе в механизм противоопухолевого действия кураксина CBL0137 и аналогичных препаратов. Работа поддержана грантами РФФИ №18-34-00364 и №19-04-00533.