ИСТИНА

В эукариотах и археях одним из важнейших регуляторов экспрессии генов на стадии инициации биосинтеза белка является трехсубъединичный фактор инициации трансляции 2 (e/aIF2αβγ). Фосфорилирование-дефосфорилирование α-субъединицы данного фактора регулирует инициацию трансляции. Нами ведутся исследования aIF2 из гипертермофильной археи Sulfolobus solfataricus. Были клонированы гены всех трех субъединиц, получены штаммы-продуценты, белки выделены и очищены, закристаллизована изолированная γ-субъединица и полноразмерный гетеротримерный фактор. Структура γ-субъединицы была определена в свободном и связанном с нуклеотидами состоянии. Анализ полученных структурных данных позволил разработать принципиально новую модель связывания инициаторной тРНК (тРНКi) с aIF2. Кроме того, было обнаружено второе место связывания ГТФ на поверхности γ-субъединицы. Были также впервые получены пригодные к структурным исследованиям кристаллы полноразмерного aIF2, и на данный момент завершается работа по построению атомной модели этого гетеротримерного белка. В настоящее время нами ведется работа по кристаллизации комплексов aIF2 с нуклеотидами и с РНК (с мРНК и с тРНКi). Фрагменты мРНК нарабатываются методом транскрипции in vitro, а для наработки тРНКi получен штамм-продуцент. Недавно нами была предложена модель связывания aIF2 с мРНК, имеющими на 5’-конце гуанозин-трифосфат, и начаты направленные эксперименты по изучению влияния ГТФ и его аналогов на связывание мРНК γ-субъединицей, межсубъединичными димерами (αγ и βγ) и тримерным фактором (αβγ).