ИСТИНА

Теломераза представляет собой обратную транскриптазу, которая участвует в поддержании стабильности генома, синтезируя повторяющиеся теломерные последовательности на концах эукариотических хромосом. Теломеразная активность детектируется во всех иммортальных клетках, например, стволовых, половых и зародышевых, однако, с другой стороны, теломераза также отвечает за неограниченное деление клеток в 80% типов раковых образований. Основными компонентами теломеразного комплекса являются теломеразная обратная транскриптаза, каталитическая субъединица (TERT или Est2 в дрожжах) и теломеразная РНК, содержащая матричный участок, комплементарный последовательности теломерного повтора (TR, TER или TLC1 в дрожжах). Для поддержания длины теломер in vivo требуются дополнительные компоненты, такие как Est1 и Est3. Изучению теломеразы препятствует весьма низкая стабильность её компонентов. Структурных данных для этих компонентов на настоящий момент практически нет. Известно, что белки из термостабильных организмов обычно более стабильны своих нетермостабильных аналогов. В связи с этим, в качестве модельного организма нами были выбраны термотолерантные дрожжи Ogataea polymorpha (Hansenula polymorpha), способные выживать при температурах до 50 градусов. Нами были идентифицированы белки TERT (Est2), Est1 и Est3, а также теломеразная РНК в геноме этих дрожжей. Мы достоверно подтвердили, что идентифицированные нам гены действительно отвечают за соответствующие компоненты теломеразного комплекса. N-концевой домен каталитической субъединицы (TEN), обладающий отдельными функциями и свойственный только для теломеразных обратных транскриптаз, был клонирован и выделен из E.coli в нативных условиях в достаточном для дальнейших исследований количестве. Для TEN – домена удалось получить 15N и 15N13C замещенный белок, снять спектры ЯМР, провести отнесение сигналов и определить структуру белка. Также удалось получить кристалл этого белка. Уточнение структуры ведется в данный момент. Таким образом, структура TEN – домена теломеразной каталитической субъединицы будет достоверно определена и в кристалле, и в растворе. Кроме того, были показаны некоторые свойства TEN – домена, например, взаимодействие с нуклеиновыми кислотами.