ИСТИНА

Технология создания трансгенных мышей направлена на исследование функций генов, механизмов возникновения заболеваний человека и разработке способов их лечения; тесно взаимодействует с такими смежными областями науки, как ветеринария и сельское хозяйство. Вне зависимости от того, какой генетический редактор используется, схема получения мышей с измененным геномом стандартна и повысить её эффективность можно с помощью простых приемов, связанных с биологическими особенностями лабораторных животных. Проанализировав различные протоколы создания трансгенных мышей, мы провели ряд изысканий по подбору условий для получения максимально возможного количества оплодотворенных яйцеклеток, подходящих для микроинъекций и последующей эффективной подсадки эмбрионов с целью рождения максимально возможного числа жизнеспособных мышат. Во-первых, были протестированы две схемы гормональной стимуляции для суперовуляции у доноров яйцеклеток. Для наших исследований мы остановили свой выбор на использовании препарата гонадотропина сыворотки жеребых кобыл с добавлением антисыворотки ингибина, что примерно в 3 раза повысило продуктивность самок-доноров и позволило снизить количество животных для проведения эксперимента, что отразилось на уменьшении затрат на их разведение и содержание. Во-вторых, мы сравнили две популярные линии мышей-доноров зигот для микроинъекции генетической конструкции: гибридов F1 (C57Bl/6 x CBA) и инбредную линию FVB. Было показано, что количество овулировавших яйцеклеток у линии FVB было значимо меньше, чем у гибридов F1, однако, эмбрионы FVB на 22% имеют более высокую выживаемость после микроинъекции. Главным положительным аргументом в пользу выбора линии FVB является качество самих зигот – по сравнению с гибридными, зиготы FVB имеют «чистую» незернистую цитоплазму, крупные, четко различимые пронуклеусы, которые служат легкими мишенями для микроинъекций, что является решающим фактором для успешного проведения процедуры редактирования генома. Последним нашим шагом в оптимизации схемы создания трансгенных мышей являлся этап подсадки эмбрионов после микроинъекции суррогатной материи, их вынашивание, рождение и дожитие до репродуктивного возраста. Мы сравнили эффективность использования в качестве суррогатных матерей гибридных самок F1 и аутбредных CD1. По эффективности вынашивания и характеристикам материнского поведения различий между самками F1 и CD1 обнаружено не было, обе эти линии могут успешно использоваться в качестве суррогатных матерей. Однако мышам CD1 намного удобнее проводить операции по внедрению эмбрионов из-за большого размера ампулы яйцевода и широкого, с более тонкими стенками входа в яйцевод. Так же для минимизации гибели мышат и более стабильного поведения суррогатной матери, мы обратили внимание, что благоприятнее содержать суррогатных матерей поодиночке, а в качестве обогащения среды добавлять смесь семян разных злаковых культур.