ИСТИНА

Межклеточный транспорт вирусов в растениях происходит через плазмодесмы и является активным процессом, требующим участия кодируемых вирусным геномом транспортных белков. Транспортные белки обеспечивают внутриклеточный транспорт вирусного генома к плазмодесмам и модифицируют их внутреннюю структуру, что приводит к увеличению пропускной способности каналов плазмодесм и обеспечивает возможность перемещения вирусного генома в соседние клетки. Помимо этого, процесс межклеточного транспорта вирусов растений тесно связан с репликацией вирусного генома, что обеспечивается способностью транспортных белков взаимодействовать с вирусными репликазами и модифицировать мембраны эндоплазматического ретикулума (ЭПР), создавая сайты репликации вирусного генома. Вирус зеленой пятнистости гибискуса (ВЗПГ) имеет (+)РНК-геном, состоящий из двух РНК. Недавно было обнаружено, что РНК2 ВЗПГ содержит новый блок транспортных генов, включающий два гена и названный Binary Movement Block (BMB). ВМВ кодирует транспортные белки ВМВ1 и ВМВ2. Белок ВМВ1 содержит домен НТФазы/хеликазы и, как предполагают, способен взаимодействовать с вирусной геномной РНК, образуя комплекс, предназначенный для транспорта через плазмодесмы. Белок ВМВ2 является интегральным мембранным белком, взаимодействующим с мембранами ЭПР. Показано, что белок ВМВ2 имеет структурное и функциональное сходство с ретикулонами, клеточными белками, которые способны создавать кривизну липидного бислоя и необходимы для формирования трубочек кортикального ЭПР и поддержания их структуры. Подобно ретикулонам, белок ВМВ2 имеет W-подобную конформацию в мембране ЭПР, способен создавать кривизну мембраны и локализоваться в участках мембран, имеющих максимальную кривизну. Белок ВМВ2 обнаруживается в мембранных тельцах на периферии клетки, которые являются производными мембран ЭПР и локализованы вблизи плазмодесм. ВМВ1 локализуется диффузно в цитоплазме и нуклеоплазме, однако в присутствии ВМВ2 белок ВМВ1 меняет свою локализацию и ре-локализуется в ВМВ2-содержащие периферические тельца и внутреннюю полость плазмодесм, а также транспортируется в соседние клетки. Эти данные позволяют предполагать, что белки ВМВ1 и ВМВ2 взаимодействуют в клетке. Для проверки этой гипотезы был проведен делеционный мутагенез белка ВМВ1 и сайт-направленный мутагенез белка ВМВ2. С использованием конфокальной микроскопии изучали влияние внесенных мутаций на локализацию беков ВМВ1 и ВМВ2. Также была исследована способность каждого мутанта ВМВ2 направлять белок ВМВ1 в периферические ВМВ2-содержащие тельца, а для мутантов ВМВ1 - способность транспортироваться в такие тельца в присутствии белка ВМВ2 дикого типа. Полученные данные показывают, что во взаимодействии двух транспортных белков ВЗПГ участвуют С-концевой район белка ВМВ1 и N-концевой район белка ВМВ2.