ИСТИНА

Одной из важнейших проблем современной вирусологии растений является идентификация вируса в растении. Зачастую инфекция протекает бессимптомно, и выявить вирус не удаётся длительное время. В некоторых случаях, как например, при заражении вироидом веретеновидности клубней картофеля симптомы можно обнаружить только на отдельных частях растения (в данном случае – на клубнях, но не на зелёной массе), что усложняет диагностику. Существует несколько методов для диагностики вирусных заболеваний растений. В основном они основаны на иммунохимических реакциях. К таковым относятся иммуноферментный анализ (ИФА), иммуно-блотинг, иммуно-дотинг. Но главной проблемой является получение специфичных антител с высоким титром к исследуемому вирусу, способных обнаруживать его на ранних стадиях инфекции, когда его концентрация мала. Мы работали с двумя вирусами: ВОМ (вирус огуречной мозаики) и YВК (Y вирус картофеля). Использовали штаммы ВОМ - isolate PV-018 и YВК - Y0 DSMZ PV-0324. ВОМ является одним из вирусов обширного семейства Bromoviridae, которое включает в себя большое количество морфологически схожих вирусов с очень широким перекрывающимся спектром хозяев. Отсюда ясно, что выделение вируса из растения обычным методом заражения и накопления имеет высокий риск загрязнения другими схожими видами. YВК принадлежит к не столь многочисленному семейству Potyviridae, однако получение специфических антител к нему является не менее важной задачей из-за того, что YВК плохо накапливается в растении, и получение чистого препарата в количествах, необходимых для иммунизации, затруднено. Вирусы были выделены с помощью ультрацентрифугирования. Вирусный препарат был охарактеризован различными физико-химическими методами. Гены БО (белок оболочки) были амплифицированы с помощью RT-PCR (Reverse Transcription Polymerase Chain Reaction) для создания с помощью вектора на основе тобамовируса препарата химерных вирусных частиц. Целью данной работы является получение препарата химерных вирусных частиц с помощью тобамовирусного вектора, которые экспонировали бы антигенные детерминанты, идентичные природным ВОМ и YВК, имея который, можно будет получить специфические антитела к данным вирусам.