ИСТИНА

В нормальных физиологических условиях для успешного оплодотворения сперматозоид должен претерпеть ряд биохимических изменений: строение и свойства их мембран существенно меняется, а подвижность значительно возрастает. Этот процесс, называемый капацитацией, связан с уменьшением концентрации холестерина в плазматической мембране, увеличением ее текучести и проницаемости для ионов бикарбоната (HCO3-) и кальция (Ca2+), что приводит к повышению их концентрации в цитозоле. Высокие концентрации HCO3-, активируют фермент аденилатциклазу, который катализирует производство цАМФ из АТФ, что приводит к активации протеинкиназы А (ПКА) и опосредовано стимулирует кальциевый канал CatSper. Активность ПКА приводит к гиперактивации сперматозоида. В природе среда женского репродуктивного тракта оказывает на сперматозоиды активирующее действие. Было высказано предположение о том, что HCO3- и сывороточный альбумин, содержащиеся во многих культуральных и криопротекторных средах, способны вызывать активацию сперматозоидов. Так концентрация HCO3- в семенной плазме составляет от 5 мМ до 20 мМ, в то время как в женских половых путях она может достигать 90 мМ. Однако при хранении сперматозоидов нельзя допускать начала процесса капацитации, клетки должны иметь стабильную мембрану. Цель данного исследования – определить влияние различных концентраций гидрокарбонатов в буферной среде на гиперактивацию сперматозоидов. Работа состоит из 2 частей: определение жизненных свойств клеток (подвижность, целостность мембраны) при добавлении в среду HCO3- в конечных концентрациях 5 мМ, 10 мМ, 20 мМ и 50 мМ и регистрация кальциевой сигнализации в клетках в присутствии HCO3- выбранных концентраций. В ходе работы проводились тесты на жизнеспособность клеток (VitalScreen) и анализ подвижности сперматозоидов с помощью камеры Маклера. При данном подходе различий в индексах подвижности и морфологических характеристиках клеток для раз-ных концентраций бикарбонатов обнаружено не было. Возможно, необходимы более точные методы оценки для выявления признаков гиперактивации. В работе также проводилась регистрация кальциевой сигнализации с помощью флуоресцентной микроскопии методом проточных камер. Окрашенные FuraRed спер-матозоиды, иммобилизованные на полилизине, инкубировались в проточной камере с растворами с указанными концентрациями бикарбонатов. У ряда клеток при концентрациях 10 мМ и 20 мМ через 3-5 минут после начала инкубации были обнаружены увеличения концентрации [Ca2+] в цитоплазме в виде осцилляций или отдельных пиков. Таким образом, в ходе работы было показано, что бикарбонат-ионы оказывают влияние на состояние сперматозоидов, однако необходимы дальнейшие исследования для определения пороговой концентрации бикарбонатов, приводящей к гиперактивации клеток.