ИСТИНА

Введение. Культура клеток нейробластомы человека SH-SY5Y считается эффективной клеточной моделью болезни Паркинсона. Они способны к терминальной дофаминергической дифференцировке при воздействии транс-ретиноевой кислоты (РК). Биополимер поли-3-оксибутират (ПОБ) обладает пьезоэлектрическими свойствами и, соответственно, потенциалом нейрозащитного агента в сфере регенерации нервной ткани.Мы исследовали способность электроспиннинговых скаффолдов на основе ПОБ с добавлением магнитных наночастиц (ПОБ/МНЧ) и магнитных наночастиц с оксидом графена (ПОБ/МНЧ/ГО) поддерживать рост дифференцированных клеток SH-SY5Y. Методы. Клетки нейробластомы человека SH-SY5Y культивировали в ростовой среде DMEM/F12 (1:1), 15% инактивированной телячьей сыворотки (инТС), 1% антибиотика при 37°C и 5% CO₂. Среду меняли каждые два дня до достижения 80% конфлюэнтности. Нейрональную дифференцировку проводили путем последовательного снижения концентрации сыворотки в среде с воздействием 10 мкМ РК в течение 12 суток. Экспрессию нейронспецифической енолазы (НСЕ) исследовали с помощью набора ИФА (ХЕМА, Россия), оптическую плотность измеряли 450 нм на микропланшетном ридере Hidex Plate Chameleon. Дифференцированные клетки визуализировали с помощью конфокального микроскопа Olympus FV3000 с окрашиванием Hoechst 33342 и PhalloidiniFluor 594. Длину нейритов и проекционную площадь дифференцированных клеток определяли с помощью плагина NeuronJ программы ImageJ. Клетки засевали на скаффолды ПОБ, ПОБ/МНЧ и ПОБ/МНЧ/ГО, рост клеток оценивали на 2, 5, 8 и 12 сутки дифференцировки с помощью AlamarBlue.Статистический анализ проводили в GraphPad Prism 9 с использованием ANOVA и t-критерия Стьюдента. Результаты выражаются в виде среднего значения ± SEM. Результаты. Было обнаружено, что использованная методика дифференцировки привела к повышению концентрации НСЕ в дифференцированных клетках (p=0,001). 44 Длина нейритов SH-SY5Y увеличилась, а площадь клеток уменьшилась (p <0,001 и p=0,01 соответственно). Отмечено снижение роста дифференцированных клеток SH-SY5Y на скаффолдах ПОБ и ПОБ/МНЧ к 5 суткам культивирования (p <0,001), но не на скаффолдах ПОБ/МНЧ/ГО. Выводы. Полученные результаты свидетельствуют о том, что скаффолды ПОБ/МНЧ/ГО поддерживают направленный рост и нейрональную дифференцировку клеток SH-SY5Y, что подчеркивает перспективность исследования композитных скаффолдов на основе ПОБ в области регенерации нервной ткани.