ИСТИНА

В двугибридной дрожжевой системе при скрининге кДНК библиотеки Arabidopsis thaliana против транспортного белка вируса бронзовости томатов был обнаружен белок с неизвестной функцией, названный At-4/1 (von Bargen et al.,2001). Исходя из этого, нами было предположено, что 4/1 белок является фактором растения-хозяина, взаимодействующим с транспортным комплексом растительных патогенов. Мы предположили, что помимо белков транспортного комплекса 4/1 белок может взаимодействовать с нуклеиновой кислотой вирусов. Для проверки нашей гипотезы были проведены эксперименты по определению РНК-связывающих свойств белка ортолога At-4/1 – 4/1 белка из растений Nicotiana tabacum (Nt-4/1) методом сдвига в агарозном геле, позволяющим судить о возможности образования РНП комплексов in vitro. В эксперименте использовали разные формы РНК, и, в итоге, выяснили, что Nt-4/1 белок с высокой эффективностью взаимодействует с РНК вируса табачной мозаики и вироида веретеновидности клубней картофеля. Для определения домена белка, ответственного за взаимодействие с РНК, нами были получены делеционные и точечные мутанты. В результате эксперимента нам удалось установить, что за взаимодействие с РНК отвечает последовательность KQKIMKLRK, расположенная в С-терминальном домене. Также полученные результаты были подтверждены методом норд-вестерн гибридизации. С помощью метода динамического лазерного светорассеяния нами были определены размеры рибонуклеопротеидного комплекса, формируемые in vitro. С помощью гистохимического окрашивания трансгенных растений N.tabacum, содержащих ген β-глюкуронидазы (GUS) под контролем Nt-4/1 промотора, мы установили, что экспрессия гена Nt-4/1 главным образом наблюдается в жилках листьев. Таким образом, мы предполагаем, что растительный белок с неизвестной функцией Nt-4/1 взаимодействует с РНК патогенов в составе транспортных комплексов и, вероятно, влияет на их системное распространение по проводящей системе растения. Работа выполнена при финансовой поддержке РФФИ (номер проекта 12-04-00139-а) и стипендии FEBS для краткосрочных стажировок в Европе.