ИСТИНА

Серьезной проблемой, не решенной до настоящего времени, является гидролиз проламинов (ПА) – белков злаковых, составляющих основу рациона значительной части населения. ПА характеризуются высоким содержанием Pro и Gln (35 % и 50 % соответственно). Большинство известных ферментов, включая пищеварительные пептидазы человека, не способны деградировать ПА полностью. Вследствие этого гидролиз ПА «останавливается» на стадии образования крупных олигопептидов, которые обладают иммуногенными свойствами и являются причиной возникновения различных патологий, включая целиакию. Эффективным решением этой проблемы может быть использование проламинрасщепляющих пептидаз (ПАРП). ПАРП могут быть использованы также при обработке пищевого сырья для получения безглютеновых продуктов питания. Исходя из структуры ПА, такими ферментами могут являться глутамил- и пролилрасщепляющие пептидазы (ГРП и ПРП соответственно). Однако поиск ГРП и ПРП весьма затруднен. Ключевой проблемой является отсутствие надежных и чувствительных соединений, пригодных для скрининга и обнаружения ПАРП. Нами проведен дизайн и осуществлен синтез высокоселективных хромогенных п-нитроанилидных (рNA) и флуорогенных 4-амино-7-метилкумаридных (АМС) ди- и трипептидных субстратов целого ряда ГРП и ПРП, а также FRET -субстратов общей формулы Abz-Ala-Pro-X-pNA, где X = Ala, Leu, Phe и ингибиторов ПРП – производных Pro, Phe и Ile c С-концевыми остатками циклических аминов – пирролидина, пиперидина, морфолина и N-метилпиперазина. Показано, что наличие большого набора селективных ди- и трипептидных субстратов и ингибиторов позволяет обнаружить среди большого массива различных пептидаз ферменты с искомой специфичностью. Это так называемые «пептидные инструменты» первой линии поиска. Для более детального изучения способности выявленных ГРП и ПРП расщеплять ПА требуются более протяженные пептиды. Это было показано нами на примере эффективного использования окта- и декапептидов и их флуорогенных аналогов, – FRET-пептидов, являющихся фрагментами иммуногенных эпитопов α-5- и γ-2-глиадинов, Abz-QPQQPFPQ-EDDnp, Abz-LPYPQPQLPQ-EDDnp (Abz - о-аминобензоил; EDDnp - остаток N-(2,4-динитрофенил)этилендиамина).