ИСТИНА

Отличительными чертами прогрессирования карцином являются потеря опухолевыми клетками эпителиальных характеристик и приобретение мигри-рующего фенотипа. В настоящей работе сравнивали миграционные свойства клеток голоклональных и мероклональных сублиний, клонированных нами из монослойной клеточной линии гепатомы Зайдела крысы (Терюкова с соавт., 2016). Оценивали ненаправленную миграцию клеток в тесте на “зарастание раны” (scratch assay) с помощью видео- и фотосъемки, а также организацию актинового цитоскелета в клетках методом окрашивания родамином-фаллоидином. Способы движения клеток мы изучали в течение 24 ч в среде культивирования с 10 % сывороткой плодов коровы. Эпителиоподобные клетки мероклонов сдвигались в свободное пространство («рану») преимущественно коллективно, за счет смещения крае-вых пластов тесно соприкасающихся клеток, и лишь единичные фибробластоподобные клетки, встречавшиеся в этих линиях, мигрировали автономно. Голоклональные линии состояли только из фибробластоподобных клеток, у которых наблюдалась только авто-номная миграция индивидуальных клеток с активным и хаотичным движением в про-странстве «раны», без сближения обоих клеточных (рыхлых) пластов. Заполнение клет-ками пространства “раны, оценивавшееся нами в среде с 0.5 % сывороткой, происходило в основном за счет миграции клеток, без существенного вклада процесса пролиферации. Через 24 ч культивирования клетки мероклональных сублиний 1Е и 9С заполняли соот-ветственно 45 % и 56 % площади «раны», а через 48 ч – 84 % и 100 %. Клетки голокло-нальных сублиний 3H, 5F и 6H через 24 ч заполняли всего 12—16 %, а через 48 ч – 17—23 % площади «раны». Несмотря на то, что площадь «раны» уменьшалась быстрее в ме-роклональных сублиниях – за счет коллективного сдвига клеток, средняя скорость движе-ния отдельных клеток, рассчитанная по длине пути, пройденного клеткой за время наблюдения, оказывалась почти вдвое выше в голоклональных сублиниях. Так, в сублини-ях 1E и 9C – она составила 0.49 ± 0.30 и 0.51 ± 0.26 мкм/c, а в сублиниях 3H, 5F и 6H – 1.01 ± 0.94, 0.83 мкм/c, соответственно. Различия в средней скорости движения клеток между сравниваемыми сублиниями очевидно связаны доминированием в них соответ-ственно, эпителиоподобных л фибробластоподобных клеток. У фибробластоподобных клеток всех сублиний мы наблюдали проявле-ния пластичности, присущей опухолевым стволовым клеткам, – когда мезен-химный и амебоидный псевдоподиальный способы индивидуальной миграции сменяли друг друга. Известно, что именно амебоидное перемещение харак-терно для метастатических клеток, и что переход от мезенхимного типа к аме-боидному сопровождается снижением числа интегрин-опосредованных фо-кальных контактов с матриксом, откреплением цитоскелетных элементов, свя-занных с фокальными контактами, уменьшением активности цитоплазматиче-ских киназ и ГТФ-аз (FAK, Ras, Cdc42, Rho), снижением способности актино-вых микрофиламентов к «заякориванию», ослаблением их центростремитель-ного натяжения и препятствиями к образованию стресс-фибрилл. При анализе флуоресценции клеток, окрашенных родамином-фаллоидином, мы выявили у эпителиоподобных клеток мероклонов 1E и 9C наличие характерных актино-вых микрофилафиламентов в поляризованной форме, особенно в местах адге-зии базальной части плазматической мембраны к подложке, а у клеток голок-лонов 3H, 5F и 6H – отсутствие поляризованных форм актина. Таким образом, нами впервые получены свидетельства преобладания в туморогенных голоклональных сублиниях гепатомы Зайдела фибробластопо-добных мигрирующих клеток с отсутствием в них поляризованного актина, с уменьшенной адгезией к подложке и исключительно индивидуальным нена-правленным движением амебоидного типа со средней скоростью более высо-кой, чем у клеток из мероклональных сублиний.