ИСТИНА

Tenebrio molitor вредитель запасов зерновых культур. Его основными пищевыми белками являются глиадины главные запасные белки семян пшеницы. В состав глиадинов входят до 30% остатков пролина и до 50% остатков глутамина. Это обусловливает наличие пролин-специфичных пептидаз (PSP) в комплексе пищеварительных ферментов T. molitor. Среди них главной пищеварительной PSP является дипептидилпептидаза 4 (DPP 4), которая входит в состав подсемейства S9B сериновых пептидаз по классификации MEROPS. DPP 4 отщепляет Xaa-Pro дипептиды от N-конца белков, тем самым участвуя в деградации и утилизации пролин-содержащих пептидов. Для детального изучения свойств фермента было решено получить рекомбинантный препарат DPP 4 T. molitor (rTmDPP4). Рекомбинантный фермент был получен в экспрессионной системе Pichia pastoris. Были подобраны условия очистки с использованием аффинной хроматографии на Ni2+-NTA сефарозе. Выход фермента составил 44 мг/л. Для очищенного препарата rTmDPP4 изучена электрофоретическая подвижность в нативных и денатурирующих условиях, последовательность фермента подтверждена масс-спектрометрически и совпадает с последовательностью наиболее высокоэкспрессируемой пищеварительной DPP 4 T. molior. Исследованы основные физико-химические и энзиматические свойства: оптимум работы фермента находится в области рН 8, интервал рН-стабильности от 6 до 9. Эффективность гидролиза хромогенных субстратов убывала в ряду RPpNA>APpNA>GPpNA (где pNA - остаток пара-нитроанилина), что демонстрирует предпочтительное расположение аргинина в P2 положении, тогда как рекомбинантный фермент человека гидролизовал все исследуемые субстраты с одинаковой эффективностью. Гидролиз токсических пептидов глиадинов исследовали с использованием десятичленного пролин- и глутамин-богатого пептида. Показано, что rTmDPP4 гидролизует этот пептид эффективнее, чем рекомбинантная DPP 4 человека. Работа выполнена при финансовой поддержке грантов РФФИ: 16-34-01012 мол_а, 17-34-80158 мол_эв_а, 15-04-08689-a, 15-03-06675-a; гранта Фонда содействия инновациям (FASIE): УМНИК 8874ГУ/2015 (0018984).