Описание:Занятия на Большом практикуме по биохимии в рамках раздела "Биоэнергетика" (320 акад.час) предназначены для ознакомления с методами организации и проведения научной работы в области биоэнергетики.
1. Ведение лабораторного журнала (хронологический и секционный типы в бумажном и электронном вариантах - авторская разработка Каспаринского Ф.О.). Химическая посуда (стекло, пластик, бумага; хромпик, мыло, вода). Устройство и правила работы с дистиллятором, бидистиллятором, аналитическими весами и рНметром.
2. Ионообменные смолы. Устройство ионообменной колонки для очистки растворов от примесей двухвалентных катионов. Приготовление и уравновешивание ионообменной смолы.
3. Металлохромные индикаторы. Титрование растворов Са2+ и Mg2+.
4. Выделение из печени крысы интактных митохондрий методом дифференциального центрифугирования.
5. Оценка содержания Са2+ в растворах и в митохондриальной суспензии спектрофотометрическим методом при помощи металлохромного индикатора.
6. Спектрофотометрическая регистрация кинетики энергозависимого поглощения Са2+ митохондриями. Исследование влияния ионов Mg2+ на кинетику активации электрогенного транспорта Са2+ митохондриями печени крысы.
7. Полярографическая регистрация скоростей дыхания митохондрий. Сопоставление скоростей дыхания митохондрий в средах с разной концентрацией Mg2+.
8. Расчет нормированных скоростей транспорта Са2+, содержания Са2+ в средах и в митохондриях. Правила оформления первичных результатов эксперимента.
9. Мембранный переход в митохондриях, нагруженных Са2+ в присутствии фосфата. Апоптоз.
10. Выделение суммы белков супернатантов РС с нормальными и пермеабилизованными митохондриями. Электрофорез белков с SDS в полиакриламидном геле.