Аннотация:Одним из наиболее перспективных направлений исследований является придание клеткам новых функциональных возможностей, а также создание биоаналитических устройств на их основе.
Тест-системы на основе живых клеток эффективны для скрининга лекарственных средств, для оценки токсических эффектов химических веществ, поступающих в живые организмы, для изучения бактериального и вирусного патогенеза. Живые клетки очень чувствительны к внешним воздействиям, тест-системы на их основе позволяют проводить исследования процессов клеточного стресса различной природы.
В последние годы флуоресцентные и биолюминесцентные системы детекции.все шире используются при проведении исследований в медицине в режиме реального времени. Биолюминесцентная визуализация – удобный неинвазивный метод исследования, основанный на регистрации свечения клеток или тканей.
Нами была изучена модельная система для изучения поведения микроорганизмов в условиях клеточного стресса, позволяющая измерять биолюминесценцию без разрушения клеток. Метод основан на биолюминесцентной реакции окисления люциферина в присутствии ATФ, катализируемой люциферазой. Объектом исследования стали клетки E.coli, продуцирующие активную люциферазу светляков. По изменению интенсивности свечения клеток можно судить о степени воздействия на клетки различных факторов физической и химической природы, в частности, температуры и воздействия антимикробных препаратов.
Цель данной работы - изучение влияния температуры и антимикробных препаратов группы полимиксинов на жизнеспособность и метаболический статус бактерий E.coli, несущих гены мутантной термостабильной люциферазы светляков, по изменению интенсивности биолюминесценции эндогенной люциферазы и содержания АТФ.