|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ФНКЦ РР |
||
Совершенствование технологической платформы продукции рекомбинантных моноклональных антител в растении Nicotiana benthamianaдипломная работа (Специалист)
- Научный руководитель: Комарова Т.В.
- Автор: Липскеров Ф.А.
- Тип: Специалист
- Организация, в которой проходила защита: МГУ имени М.В. Ломоносова
- Год защиты: 2022
- Аннотация: Подавляющее большинство рекомбинантных антител, которые в настоящее время используются для терапии различных заболеваний, в том числе рака молочной железы, продуцируют в системе клеток млекопитающих. Несмотря на значительные успехи в направлении повышения выхода антител, по-прежнему себестоимость производства подобных рекомбинантных макромолекул довольно высока. Поэтому актуальным представляется поиск и совершенствование альтернативных систем продукции, а также разработка и получение антител с новыми свойствами. Одной из перспективных платформ продукции является растительная система, в которой, используя агробиотехнологические подходы, за несколько дней можно накопить большое количество рекомбинантного белка, в т.ч. антител. Целью данной работы было создание биспецифического моноклонального антитела против онкобелка HER2/neu и разработка подходов для повышения уровня продукции рекомбинантного белка в растительной системе в условиях транзиентной экспрессии при использовании вирусных векторов. Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи: 1) разработать дизайн биспецифических антител против онкобелка HER2/neu и накопить их в растении N. benthamiana; 2) оценить функциональную активность продуцированных в растении биспецифических антител; 3) исследовать влияние повышенного уровня синтеза белков, содержащих сигнал ядерной локализации (NLS), на продуктивность экспрессионных векторов на основе геномов вирусов растений; 4) оценить возможность использования NLS-содержащих белков для повышения продукции антител в растительной клетке. В результате первого этапа работы была доказана возможность сборки и продукции биспецифических антител в растении N. benthamiana. При использовании подхода «два в одном» и дополненных антител получены биспецифические антитела HCP-LCH и Bi-mab, определены параметры взаимодействия между антителами и антигеном. В результате второго этапа работы было обнаружено, что суперпродукция белков, содержащих сигнал ядерной локализации (NLS), стимулирует репродукцию вирусного вектора на основе генома ВТМ. Показано, что экспрессионный вектор, кодирующий NLS или NLS-содержащий белок может быть использован для повышения уровня продукции рекомбинантных антител в растительной клетке.
- Добавил в систему: Комарова Татьяна Валерьевна