|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ФНКЦ РР |
||
Исследование влияния криоконсервации на мембраны сперматозоидовдипломная работа (Магистр)
- Научный руководитель: Симоненко Екатерина Юрьевна
- Автор: Афанасьева Светлана Игоревна
- Тип: Магистр
- Организация, в которой проходила защита: МГУ имени М.В. Ломоносова
- Год защиты: 2022
- Аннотация: Несмотря на то, что криоконсервация является надежным способом сохранения биологических объектов таких, как кровь, стволовые клетки, гаметы и некоторые ткани, она также приводит и к нежелательным явлениям, вызванным повреждением биологического материала. Плазматическая мембрана наиболее подвержена повреждениям при криоконсервации, однако, существующие комплексные крипротекторные среды чаще всего не содержат компонент, направленных на стабилизацию именно этой клеточной структуры. Для сперматозоидов стабильность мембраны является критическим фактором - при любых изменениях в плазматической мембране запускается реакция капацитации с последующей акросомальной реакцией. В таком активированном состоянии клетки храниться не могут. Поэтому целью работы Афанасьевой С.И. является анализ влияния изменения концентрации холестерина в мембране сперматозоидов на выживаемость клеток после криоконсервации. Для достижения данной цели необходимо было решить ряд задач, одной из которых стало определение наиболее оптимального метода измерения и оценки концентрации холестерина в мембране сперматозоидов. В ходе выполнения работы Афанасьевой С.И. был проведен сбор обширных литературных данных, были изучены основные биофизические процессы, происходящие в мембранах клеток при криоконсервации, а также роль холестерина в стабилизации мембран. Во время проведения исследования Светланой были освоены все рутинные методы работы со сперматозоидами. Светлана разработала протоколы для 4 методов оценки концентрации холестерина непосредственно в сперматозоидах человека: метод ферментативного анализа, метод инфракрасной спектроскопии, ВЭЖХ и метод Абеля-Кендалла (тест Либермана-Бурхарда). Всеми методами были проведены измерения концентрации холестерина в сперматозоидах человека, что составило 1,2 ± 0,3 нмоль/млн клеток, а наиболее подходящим для рутинного лабораторного анализа был выбран метод ферментативного анализа. В ходе исследования было выявлено, что в мембране сперматозоидов пациентов с диагнозом олигоастенозооспермия концентрация холестерина может значительно превышать нормальные показатели в 3 - 5 раз и составлять 5,5 ± 1,9 нмоль/млн клеток, что в свою очередь может быть причиной низкой криотолерантности. Ранее в нашей группе были проведены первые исследования по использованию комплексов циклодекстрин-холестрени (ЦД-Х) для «доставки» холестерина в мембрану сперматозоидов. Афанасьева С.И. продолжила эти исследования. Ею было показано методом рентгеноструктурного анализа, что комплексы ЦД-Х при добавлении в криопротекторные среды не приводят к увеличению кристаллообразования. Также ею была получена кривая насыщения мембраны сперматозоида холестерином с помощью данных комплексов. В ходе выполнения работы Афанасьева С.И. определила оптимальную концентрацию ЦД-Х для модификация криопротекторной среды - 1 мг/мл, которая повышает криотолерантность клеток на 20%.
- Добавил в систему: Симоненко Екатерина Юрьевна