|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ФНКЦ РР |
||
Иммуноферментный анализ аутоантител против β1-адренорецептора человека с использованием рекомбинантных антигеновдипломная работа (Специалист)
- Научные руководители: Григоренко В.Г., Левашов П.А.
- Автор: Мельничук Е.А.
- Тип: Специалист
- Организация, в которой проходила защита: МГУ имени М.В. Ломоносова
- Год защиты: 2017
- Аннотация: На сегодняшний день считается, что аутоиммунную природу имеет большое количество заболеваний, в том числе сердечно-сосудистых, например, дилатационная кардиомиопатия (ДКМП). ДКМП является одной из основных причин сердечных заболеваний у взрослых лю-дей. У части пациентов с таким диагнозом обнаруживают аутоантитела к β1 адренорецептору. Данный рецептор реагирует на действие норадреналина и при его стимуляции увеличивается частота и сила сердечных сокращений, артериальное давление и потребность миокарда в кислороде. Присутствие в организме человека аутоантител к β1-адренорецептору, что приводит к постоянной стимуляции и изнашиванию сердечной мышцы. Сложность диагностики аутоиммунных заболеваний методом иммуноферментного анализа, в частности, детекция аутоантител к β1-адренорецептору, связана с выбором и дос-тупностью соответствующего антигена для проведения ИФА. Методы белковой инженерии обладает рядом существенных преимуществ по сравнению с выделением белков из природных источников и получением реагентов традиционными методами химического синтеза. Полученные таким способом рекомбинантные препараты, как правило, имеют гомогенный состав, известную стехиометрию и сохраняют функциональную активность. Также к пре-имуществам следует отнести высокий выход целевого препарата, его стоимость, воспроизводимость и технологичность получения. Цель работы – получение рекомбинантных антигенов (эпитопов β1-адренорецептора человека) в составе конъюгатов с белком, связывающим жирные кислоты, из сердца человека (с-БСЖК) для разработки иммуноферментного анализа аутоантител. В задачи работы входило создание системы экспрессии генов, кодирующих рекомбинантные эпитопы β1-адренорецептора человека; разработка иммуноферментного метода анализа (ИФА) аутоантител против β1-адренорецептора человека; анализ образцов сывороток/плазм крови пациентов разработанным методом ИФА. В результате выполнения дипломной работы впервые были созданы 3 штамма E.coli - продуцента рекомбинантных эпитопов (А, В, С) β1-адренорецептора в составе химерных белков в С-концевой области белка-носителя БСЖК, отделенных линкерной последовательностью (Gly4Ser)3. Оптимизированы условия экспрессии и метод выделения и очистки, позволяющий получать гомогенный препарат рекомбинантных химерных эпитопов β1-адренорецептора в количестве 15 - 25 мг с 1 литра культуры клеток E.coli. Разработан твердофазный иммуноферментный метод определения аутоантител к β1-адренорецептору в сыворотке/плазме человека. Выбран оптимальный химерный рекомбинантный антиген (B). Воспроизводимость результатов измерений не превышала 8% (N=10). С помощью разработанной иммуноферментной тест-системы было проанализирован 151 образец сывороток крови пациентов с различными диагнозами кардиопатологий и заболеваниями щитовидной железы. В 24 случаях выявлен повышенный уровень антител к β1-адренорецептору человека у пациентов с подтверждённым диагнозом сердечно-сосудистых заболеваний.
- Добавил в систему: Григоренко Виталий Георгиевич