|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ФНКЦ РР |
||
ИЗУЧЕНИЕ МЕХАНИЗМА ТРАНС-ТРАНСЛЯЦИИ МЕТОДОМ САЙТ-НАПРАВЛЕННОГО МУТАГЕНЕЗАдипломная работа (Специалист)
- Научные руководители: Шпанченко О.В., Донцова О.А.
- Автор: Розов А.С.
- Тип: Специалист
- Организация, в которой проходила защита: МГУ имени М.В. Ломоносова
- Год защиты: 2005
- Аннотация: Траспортно-матричная РНК была обнаружена в 1978 г. в пост-рибосомном супернатанте, полученном из клеток Escherichia coli. Дальнейшие исследования показали, что ген ssrA, кодирующий тмРНК, не имеет критического значения для жизнеспособности клеток E. coli и B. subtilis в нормальных условиях, но его делеция или повреждение замедляют рост клеток при менее благоприятных условиях, таких как повышенная температура или углеродное голодание. Однако функция тмРНК оставалась неизвестной до 1996 г. Эта уникальная молекула, сочетающая в себе свойства тРНК и мРНК, является основным компонентом системы транс-трансляции. Кроме того, показано ее участие в ряде регуляторных процессов в различных прокариотических организмах. В некоторых из них нарушение функции гена приводит к летальному фенотипу. Транс-трансляция – процесс переключения синтеза пептида с мРНК на матричную часть тмРНК. Аминоацилированная тмРНК взаимодействует с рибосомами, остановившимися при трансляции мРНК из-за отсутствия стоп-кодона, нехватки необходимой тРНК (на так называемых «редких» кодонах) или неблагоприятного для терминации контекста. При этом мРНК вытесняется из рибосомы с заменой на матричную часть тмРНК. Трансляция терминирует на стоп-кодоне, которым заканчивается открытая рамка считывания тмРНК, и рибосомы возвращаются в трансляционный пул, а к недосинтезированному белку добавляется сигнальный пептид, узнаваемый протеазами клетки. Таким образом, можно заключить, что транс-трансляция – своего рода процесс контроля качества трансляции, причем любая задержка трансляции воспринимается как фатальная ошибка. Действительно, даже если мРНК имеет нормальный стоп-кодон, но трансляция по какой-либо причине остановилась, мРНК будет разрезана неизвестным фактором, ассоциированным с рибосомой, система транс-трансляции придет в действие, а мРНК подвергнется деградации. На данный момент накоплен большой объем информации о процессе транс-трансляции: известны первичная и вторичная структуры тмРНК, выяснен состав системы транс-трансляции, изучена кинетика аланилирования тмРНК, определена структура преинициаторного комплекса тмРНК с рибосомой. Но детальный механизм взаимодействия тмРНК с рибосомой неизвестен, равно как и молекулярный механизм протекания транс-трансляции. В данной работе с помощью сайт-направленного мутагенеза были получены молекулы тмРНК, не способные завершить процесс транс-трансляции. Их изучение поможет пролить свет на механизм транс-трансляции. Кроме того, использование мутантных тмРНК позволит выделить комплексы тмРНК с рибосомой в препаративных количествах, что необходимо для структурных исследований.
- Добавил в систему: Шпанченко Ольга Валерьевна