ИСТИНА

В настоящей работе были идентифицированы основные компоненты теломеразы дрожжей H. polymorpha – теломеразная каталитическая субъединица (hpTERT) и теломеразная РНК (hpTER). Высокая стабильность каталитической субъединицы теломеразы H. polymorpha позволила разработать метод выделения рекомбинантного белка, пригодного для структурных и функциональных исследований. Он включает экспрессию каталитической субъединицы теломеразы с 6His и S-тагами на N-конце белка в E.coli, очистку методами аффинной и ионообменной хроматографии. Впервые было показано, что в системе in vitro рекомбинантная каталитическая субъединица теломеразы обладает ограниченной обратнотранскриптазной активностью. Идентифицированная в работе теломеразная РНК H. polymorpha представляет собой одну из самых компактных теломеразных РНК дрожжей, ее длина составляет 824 нуклеотида. Анализ матричного участка теломеразной РНК методами мутагенеза, детекция теломеразной активности H. polymorpha in vitro и анализ теломер выявили существенное различие в работе теломеразы in vitro и in vivo. Теломераза, выделенная in vitro, использует дополнительный нуклеотид с 5’ конца матричного участка (A170) в реакции обратной транскрипции. Синтезируемый таким образом тимин отсутствует в аннотированной последовательности теломер. Анализ последовательности концов хромосом показал, что нет ни одного случая присутствия тимина в этой позиции in vivo. На основе полученных данных предложена модель регуляции теломеразы на конце хромосомы.