ИСТИНА

Кальций играет важнейшую роль во многих процессах жизнедеятельности. Одной из основных функций кальция в живых организмах является участие в передаче сигнала и регуляции различных клеточных функций. В живых клетках существует сложная и развитая система поддержания концентрации кальция на необходимом уровне и восприятия колебаний его концентрации. Действие Са21" реализуется через работу множества Са2+-связывающих белков. Одними из эгих белков являются аннексины. Аннексины — мультигениое семейство Са2+-зависимых фосфолипид-связывающих белков. Отличительной особенностью белков этого семейства является способность Са2+ зависимым образом связываться с природными и модельными фосфолипидпыми мембранами. Белки этого семейства находят у всех эукариот, они присутствуют во всех тканях организма, однако биологические функции этих белков до сих пор однозначно не установлены. Обнаружено участие аннексинов в таких процессах, как мембранный транспорт, слияние внутриклеточных секреторных пузырьков с плазматической мембраной в ходе экзоцитоза, организация структу рных доменов мембран, транспорт ионов, адгезия клеток, проведение сигнала, а также наличие у аннексинов противовоспалительной и антикоагулянтной активности (Moore, Dedman, 1982, Geisowet al., 1984, 1987, Burgoyne, Geisow, 1989, Romisch, Paques, 1991, Creutz, 1992, Gerke, Moss, 1997, 2002, Gerke et al., 2005). Функция аннексинов в мышечной клетке до сих пор окончательно не установлена. В скелетных мышцах кальцием регулируется их основная функция - сокращение. Саркоплазматический ретикулум служит внутриклеточным депо кальция. Концентрация кальция в цитоплазме клетки регулируется кальциевыми каналами и активными переносчиками, в том числе Са^-АТФазои саркоплазматического ретикулума, а также Ca2t-связывающими белками (они также принимают участие в транедукции кальциевого сигнала). Ранее в нашей лаборатории было показано, что в скелетных мышцах присутствуют такие представители семейства аннексинов, как аннексии А6, А5, А4 и A3. Основная доля приходится на аннексии А6, значительно менее представлен А5, а А4 и A3 находятся лишь в небольшом количестве. Аннексины в скелетных мышцах локализуются в сарконлазмагическом ретикулуме (Melgunov et al., 1990), поэтому изучение аннексинов саркоплазматического ретикулума может оказаться пролезпым для установления тонких механизмов регуляции мышечного сокращения. Одним из направлении таких исследований может быть изучение взаимодействия аннексинов с компонентами мембран сарконлазматического ретикулума. Так, например, крайне интересной является способность образовывать прочные, Са^-независимые связи с мембранами (Raeymaekerse al.,1985). В таком случае аннексины перестают экстрагироваться растворами хелаторов и требуют для солюбнлизацни обработки детергентами. Механизм образования аннексинами таких связей в различных тканях остается неизученным, хотя можно предположить, что в нем могут принимать участие как белковые, так и липидные компоненты мембран, а также, возможно, ионы других, помимо Са2\ двухвалентных металлов. Поэтом}', целю настоящей работы было изучить взаимодействие аннексинов А5 и А6 с различными компонентами мембран сарконлазматического ретикулума. Исходя из поставленной цели, были сформулированны следующие задачи: 1) разработать и наладить метод получения высокоочшценных препаратов аннексинов А5 и А6; 2) изучить влияние ионов двухвалентных металлов на опосредуемую аннексинами агрегацию липосом; 3) выяснить, образуют ли аипексины сарконлазматического ретикулума формы, связанные с мембранами Са2+-независимым образом; 4) проверить, способны ли аннексины А5 и Аб прочно связываться с мембранными везикулами, не содержащими белков; 5) оценить влияние аннексинов А6 и А5 на активность основного фермента сарконлазматического ретикулума - Са2<-зависимой АТФазы; 6) провести поиск белков мембран сарконлазматического ретикулума, связывающихся с аииексином А6.