ИСТИНА

Цель исследования Изучить возможности клинико-иммунологической оценки активности и прогноза локального и генерализованного вариантов гранулематоза с полиангиитом (Вегенера). Задачи исследования 1. Исследовать экспрессию генов и продукцию провоспалительных, противовоспалительных, регуляторных цитокинов у больных с локальной и генерализованной формами ГПА, а также у больных с обострением и ремиссией ГПА. 2. Изучить клинико-иммунологическую связь изменения цитокинов в мононуклеарах периферической крови и сыворотке c наличием признаков васкулита и гранулематозного воспаления, поражением различных органов и тканей у больных ГПА. 3. Оценить возможность использования цитокинов в качестве дополнительных маркеров обострения или наличия генерализованной формы ГПА. 4. Определить факторы риска обострения ГПА в течение одного года на основе изучения цитокинового профиля. Научная новизна Впервые в России проводилось исследование цитокинового профиля у больных с различными формами ГПА. В российской выборке выявлено отличие экспрессии генов цитокинов в МПК по сравнению со здоровыми добровольцами. Экспрессия генов цитокинов в МПК у больных с локальной формой ГПА достоверно не отличалась от экспрессии генов цитокинов в МПК больных с генерализованной формой ГПА. Показано значение экспрессии гена ИЛ-18 у больных с обострением ГПА. Исследование сывороточного уровня ИЛ-18 продемонстрировало, что уровень данного цитокина достоверно повышается у больных генерализованной формой ГПА. Исследование сывороточного ИЛ-8 указывает на то, что данный цитокин принимает участие в обострении ГПА. Установлена чувствительность и специфичность определения сывороточного ИЛ-18 как дополнительного показателя наличия генерализованной формы ГПА, а также экспрессии гена ИЛ-18 и продукции ИЛ-8 как дополнительных маркеров активности ГПА. Впервые в России у больных ГПА проводилось 5 проспективное исследования с целью оценки факторов риска развития обострения ГПА в течение одного года. Показано, что обнаружение ИЛ-1β в сыворотке крови в диапазоне от 5,1 до 19,7 пг/мл является фактором риска повышения индекса BVAS на 2 и более баллов у больных ГПА в течение одного года. Впервые проводилось исследование взаимосвязи поражения органов и тканей при ГПА с изменением уровня цитокинов. Определена корреляционная связь между наличием критериев гранулематозного воспаления и цитокинов, участвующих в Th1 и Th2 типах иммунного ответа; критериев васкулита и продукцией ИФН-α, ФНО-α, ИЛ-1β и экспрессией мРНК ИЛ-6. Теоретическая и практическая значимость работы Полученные данные указывают на изменения цитокинов, которые приводят к развитию иммуновоспалительного процесса у больных гранулематозом с полиангиитом (Вегенера), а также на участие цитокинов в поражении различных органов при данном заболевании. Изучение маркеров активности и наличия генерализованной формы гранулематоа с полиангиитом (Вегенера) на основе исследования цитокинового профиля позволяет определить мишени терапевтического воздействия, что является перспективным при разработке и внедрении в лечение генно-инженерных биологических препаратов у данной группы больных Практическая значимость исследования определяется выявлением дополнительных маркеров обострения заболевания, а также наличия генерализованных форм ГПА, на основе исследования цитокинового профиля. В результате нашего исследования показано, что определение мРНК ИЛ-18 в МПК у больных ГПА является и может быть использовано как дополнительный маркер активности заболевания. Выявлено, что ИЛ-18 достоверно чаще повышается у больных генерализованным ГПА, а определение сывороточного ИЛ-18 может быть использовано как дополнительный маркер развития генерализованных форм ГПА. Установлено, что обнаружение сывороточного ИЛ-1β в диапазоне от 5,1 до 19,7 пг/мл является фактором риска развития обострения ГПА в течение 1 года. Основные положения, выносимые на защиту. 1. У больных с локальными и генерализованными формами ГПА наблюдаются сопоставимые изменения экспрессии генов цитокинов в мононуклеарах периферической крови 2. При обострении ГПА по сравнению со здоровыми добровольцами отмечается достоверное повышение экспрессии мРНК ИЛ-18 в мононуклеарах периферической крови 3. Маркером генерализованной формы ГПА является уровень сывороточного ИЛ-18 выше 258,5 пг/мл. Поражение почек в рамках ГПА ассоциировано со снижением экспрессии 6 мРНК ИФН-α в МПК, а поражение легких - с повышением экспрессии мРНК ИФН-γ, ИЛ-6, ФНО-α в МПК и продукции ИЛ-18. 4. Достоверным фактором риска обострения ГПА в течение 1 года является сывороточный уровень ИЛ-1β от 5,1 до 19,7 пг/мл, а обострение ГПА ассоциировано с повышением сывороточного уровня ИЛ-8. 5. Признаки васкулита у больных ГПА коррелируют с повышением продукции ИФН-α и ФНО-α, а признаки гранулематозного воспаления, поражение носа и придаточных пазух - с подавлением экспрессии генов ИЛ-4. Методология и методы исследования Теоретической базой проведенной диссертационной работы являлись работы зарубежных авторов, в которых показаны противоречивые данные о механизмах развития иммуновоспалительного процесса и методов оценки активности и распространенности ГПА, а также неполное изучение вопроса изменения цитокинов только у больных с гранулематозом с полиангиитом. В отечественных работах не проводилось изучение цитокинов-маркеров: активности, наличия генерализованной формы заболевания. Отсутствовали данные о цитокинах-предикторах обострения, а также взаимосвязь обнаружения тех или иных цитокинов при поражении определенных органов и систем. Перечисленные обстоятельства стали основой для последующего изучения данной проблемы. Методологической базой является применение методов диагностики: ОТ-ПЦР для определения транскрипции генов цитокинов в МПК и ИФА для определение содержания цитокинов в сыворотке крови больных ГПА. Оценка активности и распространенности заболевания проводилась на основании данных клинической картины заболевания, шкал BVAS и VDI, лабораторно-диагностических методов обследования. Степень достоверности и апробация результатов В ходе выполнения данной работы применялось сертифицированное лабораторное оборудование и современные методы обследования пациентов, в результате чего получен значительный объем экспериментальных данных. Анализ полученных данных проводился в соответствии с адекватными общепринятыми методами и критериями статистической обработки. Методы исследования выбраны в соответствии с поставленными целями и задачами. Положения, выносимые на защиту, выводы и рекомендации основаны на результатах исследования, достоверность которых подтверждена актом проверки первичной документации. Апробация работы проведена 15 февраля 2018 года на заседании сотрудников кафедры внутренних, профессиональных болезней и пульмонологии ФГАОУ ВО «Первый МГМУ им. И.М. Сеченова» Минздрава России (Сеченовский Университет). 7 Личный вклад автора Вклад автора заключается в непосредственном участии на всех этапах исследования: от постановки задач, их теоретической и практической реализации до обсуждения результатов в научных публикациях и их внедрения в практику. Внедрение результатов в практику Результаты используются в работе ревматологического отделений клиники нефрологии, внутренних и профессиональных болезней им. Е.М. Тареева Университетской клинической больницы №3 и кафедры внутренних, профессиональных болезней и ревматологии медикопрофилактического факультета Первого МГМУ им. И.М. Сеченова Минздрава России (Сеченовский Университет). Соответствие паспорту научной специальности Научные положения и результаты исследования соответствуют формуле специальности 14.01.04 – "внутренние болезни" и пунктам: №2, №3 и №5, а также формуле специальности 14.03.09 - "клиническая иммунология, аллергология" и области исследования специальности: изучение патогенеза иммунозависимых заболеваний (иммунодефицитных состояний, аллергической и аутоиммунной патологии), разработка и усовершенствование методов диагностики и профилактики аллергических и иммунопатологических процессов. Публикации По теме диссертации опубликовано 11 печатных работ, в том числе 5 в журналах, рекомендованных ВАК Минобрнауки России, 6 - в зарубежных изданиях. Материалы диссертации представлены на ANCA Workshop (Лондон, 2015 (постерный доклад); Токио, 2017 (2 постерных доклада)), EULAR (Мадрид, 2013 (постерный доклад); Рим, 2015 (постерный доклад)) Объем и структура диссертации Диссертация изложена на 126 страницах печатного текста и состоит из введения, обзора литературы, описания материалов и методов исследования, результатов собственного исследования, их обсуждения, выводов и практических рекомендаций, содержит 5 рисунков и 28 таблиц. Список литературы содержит 106 источников, из них 37 отечественных. Клиническое исследование проводилось на базе кафедры внутренних, профессиональных болезней и пульмонологии медико-профилактического факультета (с 01.04.2018 - кафедра внутренних, профессиональных болезней и ревматологии) в клинике нефрологии, внутренних и профессиональных болезней им. Е.М. Тареева УКБ №3 Первого МГМУ им. И.М. Сеченова 8 Минздрава России (Сеченовский Университет) (заведующий кафедрой и директор клиники – доктор медицинских наук - Моисеев С.В.).