ИСТИНА

Изобретение относится к области биохимии и может быть использовано для лабораторного и промышленного производства пероксидазы высокого качества из корней хрена для диагностических целей. Измельченную биомассу корней хрена выдерживают в 0.1 М буферном растворе фосфата натрия рН 7.0, предварительно продутым азотом, в присутствии 5 мкМ раствора гемина и 5 мМ хлористого кальция. Экстракт отделяют декантацией, с последующей фильтрацией и концентрированием ультрафильтрацией через ультрафильтры с размером пор менее 30 кДа. Экстракт фермента насыщают сульфатом аммония до 35% от насыщения и наносят на колонку с фенил-сефарозой, после интенсивного промывания буфера с сульфатом, активные фракции снимают градиентом сульфата аммония (35%-0%) и увеличением рН до 8.0. Фермент дополнительно очищают гель-фильтрацией на Toyopearl HW55F, подвергают диализу и сушат методом сублимации. Использование гемин-содержащих буферов на стадии экстракции и гель-фильтрации позволяет получать высокоактивный фермент с высоким выходом за счет 100% насыщения фермента гемином. Предложенный способ позволяет ускорить процесс производства фермента и существенно улучшить его каталитические характеристики и стабильность. 6 з. п. ф-лы. 1пр. 1 табл.