![]() |
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ФНКЦ РР |
||
Изобретение относится к области биотехнологии, а именно к способам получения, выделения и очистки рекомбинантных белков, в частности к получению высокоочищенного препарата правильно свернутой рекомбинантной эндонуклеазы S.marcescens. Способ предусматривает получение рекомбинантного белка продукцией в E.coli в виде нерастворимых телец включения, получение и отмывку телец включения с последующей солюбилизацией тел включения, очисткой денатурированного белка в денатурирующих и восстанавливающих условиях металлохелатной хроматографией на Ni2+ IMAC Sepharose FF с последующим рефолдингом с целью получения активной формы фермента за счет образования 2-х внутрицепочечных дисульфидных связей, и далее хроматографичекую очистку белка из рефолдируемой смеси металлохелатной хроматографией на Ni2+ IMAC Sepharose FF и последующей анионообменной хроматографией на DEAE Sepharose FF, которая является полирующей и концентрирующей. Изобретение решает задачу создания способа получения в промышленных объемах высокоочищенной ферментативно активной рекомбинантной эндонуклеазы S.marcescens, пригодной для использования на стадии удаления нуклеиновых кислот в биофармацевтическом производстве.