![]() |
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ФНКЦ РР |
||
Целью проекта является изучение подходов к созданию новых ненуклеозидных ингибиторов обратной транскриптазы второго поколения (аналогов рилпивирина) и их инъекционных депо-форм на основе полилактидных микросфер, а также исследование кинетики высвобождения рилпивирина и его аналогов с использованием математического подхода. В связи с этим поставлены следующие задачи: синтезировать новые потенциальные антиретровирусные агенты диарилпиримидинового ряда и исследовать их противовирусную активность; изучить различные подходы к созданию инъекционных депо-форм на основе микросфер из полилактидов (PLGA/PLA), содержащих антиретровирусные препараты из группы диарилпиримидинов (на примере рилпивирина); исследовать влияние параметров процесса получения в зависимости от метода (эмульсионный, микрофлюидный, распылительное высушивание) на основные характеристики микросфер (в том числе размер, распределение по размерам, морфология поверхности, содержание рилпивирина, эффективность включения); изучить кинетику высвобождения антиретровирусных агентов из полученных микросфер in vitro и оценить ее зависимость от параметров процесса получения и свойств полимерной матрицы на примере рилпивирина; оценить влияние физико-химических свойств новых производных диарилпиримидинового ряда на эффективность их включения в микросферы; изучить кинетику высвобождения новых антиретровирусных агентов (на примере одного или двух) из полилактидных микросфер in vitro и оценить ее зависимость от химической структуры новых молекул; установить корреляционную зависимость между профилями высвобождения, полученными in vitro (экспериментально) и расчетными с использованием математических моделей (на примере одного или двух).
Viral infections pose is a significant threat to the health system in the world. Despite the significant success of modern antiretroviral therapy, the HIV epidemic remains a serious threat to the global health system. Moreover, currently available treatment methods require lifelong daily intake of antiretroviral drugs, which often leads to low compliance and the development of HIV resistance. The current HIV treatment regimen (highly active antiretroviral therapy), including a combination of three or more antiretroviral drugs (combination antiretroviral therapy (cART)), effectively suppresses HIV replication. Non-nucleoside reverse transcriptase inhibitors (NNRTIs) are key components of combination therapy. Data on the efficacy and safety of new drugs obtained in clinical trials and the emergence of new laboratory diagnostic capabilities, including determining the resistance of the virus to drugs and measuring the levels of antiretroviral drugs in blood plasma (the so-called monitoring of therapeutic concentrations (MTC)), now allow clinicians choose highly effective first-line ART regimens and maintain the possibility of using other antiretroviral drugs and their combinations with I eat second and third row. In addition, the possibility of prescribing new drugs and new dosage forms that require less frequent admission and have improved qualities, for example, taste, can improve tolerance and the degree of adherence to the regimen of drugs. To achieve this goal, most researchers note the need to develop new treatment strategies, the creation of new NNRTIs with increased efficacy and safety, including dosage forms for parenteral administration of long-acting antiretroviral drugs (ARPs) that provide an effective level of plasma concentration for weeks and even months. The use of depot injections based on poly(lactic-co-glycolic acid) (PLGA) will allow for a long-acting and controlled release of ARPs and reduce their toxicity, which should significantly improve the patient's quality of life. In addition, the inclusion of NNRTIs in the polylactide matrix will make it possible to control their release profile compared to the known nanocrystal-based injection form. This project seeks to find new derivatives of diarylpyrimidine with antiretroviral activity, and to study approaches to creating depot injections of these compounds based on poly(lactic-co-glycolic acid) (PLGA) microspheres, including assessing the correlation of release profiles between experimental or model curves. An understanding of the mechanisms of ARP release and the selection of an adequate mathematical model will help outline ways to effectively predict pharmacokinetics.
В результате проведенных исследований в рамках данного проекта предполагается получить на основе диарилпиримидинов, содержащих пирролидиновый фрагмент, ряд соединений, обладающих широким спектром противовирусной активности, которые станут основой для создания ненуклеозидных ингибиторов обратной транскриптазы нового поколения, создать их инъекционные депо-формы и исследовать кинетику их высвобождения для прогнозирования фармакокинетики. В частности, мы ожидаем, что: 1) будет осуществлен синтез новых молекул, будут обобщены и систематизированы данные по их синтезу, установлена и подтверждена структура новых соединений аналогов Рилпивирина, имеющие различные физико-химическим свойства (растворимость в воде, гидрофобность, pKa) и обладающие потенциальным противовирусным действием (МГУ) 2) будет оценено взаимодействие PLGA с антиретровирусными агентами в зависимости от метода получения полилактидных микросфер, нагруженных рилпивирином, и от физико-химических свойств новых соединений; 3) на основании данных, полученных в ходе проекта, будет предложен подход, который позволит увеличить эффективность действия новых ненуклеозидных ингибиторов обратной транскриптазы за счет включения их в полимерные микросферы; 4) данные, полученные при изучении кинетики высвобождения, позволят установить корреляцию между экспериментальными и модельными кривыми высвобождения, определить механизм высвобождения антиретровирусных агентов (рилпивирина и его производных) и прогнозировать их степень высвобождения из полимерной матрицы.
Научная группа состоит из исследователей с различными навыками и компетенциями, которые необходимы для успешного выполнения предложенного проекта. В коллектив исполнителей входят специалисты по синтезу антиретровирусных агентов; по технологии получения полимерных носителей; по методам электронной микроскопии Руководитель этой группы, к.х.н. А.В. Куркин (МГУ им. М.В. Ломоносова), имеет большой опыт в области медицинской химии и органического синтеза азотсодержащих соединений. В лаборатории органического синтеза кафедры медицинской химии и тонкого органического синтеза под руководством доцента А.В. Куркина на протяжении ряда лет успешно ведется изучение каскадных реакций в синтезе аналогов природных соединений, в которых одновременно образуются несколько связей углерод-углерод, углерод-гетероатом за одну стадию синтеза без добавления дополнительных реагентов или катализаторов. В ходе этих исследований было разработано несколько принципиально новых подходов к синтезу аналогов алкалоидов, был осуществлен синтез сложных молекул, обладающих полезными свойствами, было показано, что сложные органические молекулы можно получить в минимальное число стадий, из дешевых реагентов за короткий промежуток времени.
В результате выполнения проекта было проведено доказательство строения полученных новых соединений - аналогов рилпивирина, входящих в состав сфокусированной библиотеки малых молекул, на основании современных физико-химических методов анализа, была проведена оптимизация основных стадий синтеза, изучение возможности использования производных диарилпиримидинов в тандемных реакциях и изучено пространственное строение синтезированных молекул. Дополнительно, был проведен молекулярный докинг базы синтезированных соединений, изучены основные критерии связывания молекул в сайте обратной транскриптазы. Ряд полученных соединений были направлены в ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора для изучения противовирусной активности в отношении вирусных ферментов. В ходе выполнения работы были также разработаны и оптимизированы методы получения микросфер на основе PLGA, содержащих рилпивирин как модельное соединение, установлены параметры процесса получения микросфер, влияющие на на основные характеристики депо-форм, нагруженных рилпивирином, был проведен выбор оптимального метода получения полилактидных микросфер, нагруженных рилпивирином; проанализированы физико-химические свойства микросфер PLGA, нагруженных рилпивирином (размер, распределение по размерам, морфология поверхности, содержание рилпивирина, эффективность включения); изучена кинетика высвобождения рилпивирина из полученных микросфер in vitro в различных средах, установлено влияние различных факторов (в том числе размер микросфер, распределение по размерам, степень включения) на профили высвобождения in vitro. Идея синтеза производных диарилпиримидинов с пирролидиновым фрагментом была основана на возможности использования в качестве основных строительных блоков производных 6-карбальдегиддиарилпиримидинов и 1-аминобут-3-ен-2-олов, которые можно задействовать в тандеме реакций аза-перегруппировки Коупа и реакции Манниха, что позволяет получить сфокусированную библиотеку новых диарилпиримидинов из коммерчески доступных веществ в минимальное количество стадий с использованием минимального количества хроматографических очисток. Ключевыми стадиями данного подхода явились: синтез производных 6-карбальдегиддиарилпиримидина (9 стадий с суммарным выходом 3%-4%), синтез производных 1-аминобут-3-ен-2-ола и итоговый синтез производных 6-(пирролидин-2-ил) диарилпиримидина с использованием стереоселективного тандема реакций аза-перегруппировки Коупа и Манниха. Простота всех стадий синтеза позволила получать производные диарилпиримидина в граммовых количествах (виде рацемата) и открывает широкие возможности для синтеза производных диарилпиримидина (в том числе, и в энантиомерно чистой форме). Относительная конфигурация 4-((6-(4-ацетил-4-метилпирролидин-2-ил)-2-((4-цианофенил)амино)пиримидин-4-ил)окси)-3,5-диметил-бензонитирила была доказана с помощью суммирования данных полученных из экспериментов ЯМР 1H, 13C, APT (Attached Proton Test), HMQC (Heteronuclear Multiple-Quantum Correlation), COSY (Correlation Spectroscopy) и NOESY (Nuclear Overhauser Effect Spectroscopy).
грант РФФИ |
# | Сроки | Название |
1 | 3 марта 2020 г.-31 декабря 2020 г. | Поиск новых ненуклеозидных антиретровирусных препаратов и изучение подходов к созданию их инъекционных депо-форм на основе микросфер PLGA с применением математического анализа кинетики высвобождения |
Результаты этапа: План работ на 2020 г. по выполнению проекта включал в себя синтез производных ненуклеозидного ингибитора обратной транскриптазы из группы диарилпиримидинов – рилпивирина, доказательство строения полученных соединений на основании современных физико-химических методов анализа, оптимизация основных стадий синтеза, изучение возможности использования производных диарилпиримидинов в реакции аза-Коупа-Манниха и определение влияния условий проведения реакции аза-Коупа-Манниха (температура, растворитель, природа и количество кислоты Льюиса или Брёнстеда) на стереохимический результат. Дополнительно, планировали изучить противовирусную активность полученных производных диарилпиримидинов в отношении вирусных ферментов и установить влияние природы заместителей в пиримидиновом ядре на противовирусную активность. В ходе выполнения первого этапа работы были также запланированы: разработка и оптимизация методов получения микросфер на основе PLGA, содержащих рилпивирин как модельное соединение, установление влияния параметров процесса получения на основные характеристики депо-форм, нагруженных рилпивирином, выбор оптимального метода получения полилактидных микросфер, нагруженных рилпивирином; анализ физико-химических свойств микросфер PLGA, нагруженных рилпивирином (размер, распределение по размерам, морфология поверхности, содержание рилпивирина, эффективность включения); изучение кинетики высвобождения рилпивирина из полученных микросфер in vitro в различных средах, установление влияния различных факторов (в том числе размер микросфер, распределение по размерам, степень включения) на профили высвобождения in vitro. Идея синтеза производных диарилпиримидинов с пирролидиновым фрагментом была основана на возможности использования в качестве основных строительных блоков производных 6-карбальдегиддиарилпиримидинов и 1-аминобут-3-ен-2-олов, которые можно задействовать в тандеме реакций аза-перегруппировки Коупа и реакции Манниха, что позволяет получить сфокусированную библиотеку новых диарилпиримидинов из коммерчески доступных веществ в минимальное количество стадий с использованием минимального количества хроматографических очисток. Ключевыми стадиями данного подхода явились: синтез производных 6-карбальдегиддиарилпиримидина (9 стадий с суммарным выходом 3%-4%), синтез производных 1-аминобут-3-ен-2-ола и итоговый синтез производных 6-(пирролидин-2-ил) диарилпиримидина с использованием стереоселективного тандема реакций аза-перегруппировки Коупа и Манниха. Простота всех стадий синтеза позволила получать производные диарилпиримидина в граммовых количествах (виде рацемата) и открывает широкие возможности для синтеза производных диарилпиримидина (в том числе, и в энантиомерно чистой форме). На первом этапе нашей работы был осуществлен пяти стадийный синтез рилпивирина (РПВ), который был получен в виде смести E- и Z-изомеров (в соотношении 5:1) в граммовых количествах. Далее нами были разработаны две методики получения микросфер PLGA, нагруженных рилпивирином: путем эмульгирования с помощью диспергатора и с применением микрофлюидной технологии. Было показано, что увеличение массового отношения РПВ:PLGA приводит к увеличению содержания РПВ в микросферах. Было установлено, что добавление ДМСО в органическую фазу снижает эффективность включения рилпивирина в полилактидную матрицу (ЕЕ 78% против ЕЕ 95% без добавления ДМСО) и приводит к изменению формы частиц. Наилучшим, с точки зрения размеров частиц, степени полидисперсности и эффективности включения РПВ, для получения полилактидных микросфер, нагруженных рилпивирином, является микрофлюидный метод, а микросферы, полученные микрофлюидным методом, демонстрируют существенно более медленное высвобождение РПВ по сравнению с микросферами, полученными методом простых эмульсий. Мы показали, что увеличение кислотности среды приводит к ускоренному высвобождению РПВ из микросфер, полученных методом простых эмульсий, и не влияет на профиль высвобождения РПВ из микросфер, полученных микрофлюидным методом. Важно отметить, что в ходе выполнения первого этапа работы нами была показана возможность использования метода КЭ для качественного и количественного определения РПВ в исследуемых образцах. Также нами была показана принципиальная возможность синтеза 4-((2-((4-цианофенил)амино)-6-формилпиримидин-4-ил)окси)-3,5-диметилбензонитрила – ключевого соединения, необходимого для осуществления синтеза производных диарилпиримидинов с пирролидиновым фрагментом с использованием тандема реакций аза-перегруппировки Коупа и реакции Манниха. На следующем этапе работы мы изучили взаимодействие 4-((2-((4-цианофенил)амино)-6-формилпиримидин-4-ил)окси)-3,5-диметилбензонитрила с 1-амино-2,3-диметилбут-3-ен-2-ола (был получен в три стадии из ацетона с общим выходом 53%). В результате сигматропной перегруппировки был получен целевой продукт - 4-((6-(4-ацетил-4-метилпирролидин-2-ил)-2-((4-цианофенил)амино)пиримидин-4-ил)окси)-3,5-диметил-бензонитирил. Важным моментом данного этапа работы стало изучение влияния различных факторов (природа растворителя, температурный режим, природа катализатора) на выход продукта реакции, также были установлены основные закономерности, влияющие на стереоселективность реакции. Относительная конфигурация 4-((6-(4-ацетил-4-метилпирролидин-2-ил)-2-((4-цианофенил)амино)пиримидин-4-ил)окси)-3,5-диметил-бензонитирила была доказана с помощью суммирования данных полученных из экспериментов ЯМР 1H, 13C, APT (Attached Proton Test), HMQC (Heteronuclear Multiple-Quantum Correlation), COSY (Correlation Spectroscopy) и NOESY (Nuclear Overhauser Effect Spectroscopy). Список литературы: 1. Belov D.S., Lukyanenko E.R., Kurkin A. V., Yurovskaya M. A., Highly stereoselective and scalable synthesis of trans-fused octahydrocyclohepta[b]pyrrol-4(1H)-ones via the aza-Cope−Mannich rearrangement in racemic and enantiopure forms. // J. Org. Chem., 2012, 77 (22), 10125–10134. 2. Usach I., Melis V., Peris J.-E. Non-nucleoside reverse transcriptase inhibitors: a review on pharmacokinetics, pharmacodynamics, safety and tolerability. // Journal of the International AIDS Society. – 2013. – Vol. 16, № 1. ‒ P. 1–14. 3. Natarajan S. et al. Atropisomerism in Rilpivirine hydrochloride: Spectroscopic characterization of Rilpivirine and related impurities // Chirality. – 2018. – Vol. 30, № 8. ‒ P. 966–973. 4. Else L.J. et al. Quantification of rilpivirine in human plasma, cervicovaginal fluid, rectal fluid and genital/rectal mucosal tissues using liquid chromatography-tandem mass spectrometry // Bioanalysis. – 2014. – Vol. 6, № 14. ‒ P. 1907–1921. 5. Kumar K.R., Suneetha A., Srilakshmi N. A validated LC Method for the Estimation of Rilpivirine in API and Pharmaceutical Dosage form // Journal of Pharmacy Research. – 2012. – Vol. 5, № 8. ‒ P. 4434–4436. 6. Date A.A. et al. Development and validation of a simple and isocratic reversed-phase HPLC method for the determination of rilpivirine from tablets, nanoparticles and HeLa cell lysates // Biomedical Chromatography. – 2015. – Vol. 29, № 5. ‒ P. 709–715. 7. Shibata M. et al. Development and application of a simple LC-MS method for the determination of plasma rilpivirine (TMC-278) concentrations // Journal of Medical Investigation. – 2013. – Vol. 60, № 1–2. ‒ P. 35–40. 8. ОФС.1.1.0008.15. Остаточные органические растворители [Electronic resource] // Государственная фармакопея Российской Федерации. XIII изд. Т. I. URL: https://pharmacopoeia.ru/ofs-1-1-0008-15-ostatochnye-organicheskie-rastvoriteli/ (accessed: 20.12.2020). 9. Гребёнкин Д.Ю., Станишевский Я.М., Шохин И.Е. Современные подходы к проведению сравнительного теста кинетики растворения (обзор) // Разработка и регистрация лекарственных средств. – 2016. – Vol. 1. ‒ P. 166–171. 10. Stokbroekx S.C.M. CRYSTALLINE FORM OF 4-4-4-(2-CYANOETHENYL)-2,6-DIMETHYLPHENYL-AMINO-2-PYRIMIDINYLAMINOBENZONITRILE: pat. 2010/0189796 A1 USA. US, – 2010. 11. Watanabe T., Ono T., Kimura Y. Continuous fabrication of monodisperse polylactide microspheres by droplet-to-particle technology using microfluidic emulsification and emulsion-solvent diffusion // Soft Matter. – 2011. – Vol. 7, № 21. ‒ P. 9894–9897. 12. Ульянова Ю.В. et al. ВЛИЯНИЕ ПАРАМЕТРОВ МИКРОФЛЮИДНОГО ПРОЦЕССА НА ХАРАКТЕРИСТИКИ МИКРОСФЕР НА ОСНОВЕ ВЫСОКОМОЛЕКУЛЯРНОГО СОПОЛИМЕРА МОЛОЧНОЙ И ГЛИКОЛЕВОЙ КИСЛОТ // Успехи в химии и химической технологии. – 2019. – Vol. 33, № 3(213). ‒ P. 44–46. | ||
2 | 1 января 2021 г.-31 декабря 2021 г. | Поиск новых ненуклеозидных антиретровирусных препаратов и изучение подходов к созданию их инъекционных депо-форм на основе микросфер PLGA с применением математического анализа кинетики высвобождения |
Результаты этапа: План работ на 2021 г. по выполнению проекта включал в себя продолжение работ по синтезу производных рилпивирина, было проведено доказательство строения полученных соединений, входящих в состав сфокусированной библиотеки малых молекул, на основании современных физико-химических методов анализа, была проведена оптимизация основных стадий синтеза, изучение возможности использования производных диарилпиримидинов в тандемных реакциях и изучено пространственное строение синтезированных молекул. Дополнительно, был проведен молекулярный докинг базы синтезированных соединений, изучены основные критерии связывания молекул в сайте обратной транскриптазы. Все полученные соединения были направлены в ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора для изучения противовирусной активности в отношении вирусных ферментов. В ходе выполнения второго этапа работы были разработаны и оптимизированы методы получения микросфер на основе PLGA, содержащих рилпивирин как модельное соединение, установлены параметры процесса получения микросфер, влияющие на на основные характеристики депо-форм, нагруженных рилпивирином, был проведен выбор оптимального метода получения полилактидных микросфер, нагруженных рилпивирином; проанализированы физико-химические свойства микросфер PLGA, нагруженных рилпивирином (размер, распределение по размерам, морфология поверхности, содержание рилпивирина, эффективность включения); изучена кинетика высвобождения рилпивирина из полученных микросфер in vitro в различных средах, установлено влияние различных факторов (в том числе размер микросфер, распределение по размерам, степень включения) на профили высвобождения in vitro. Идея синтеза производных диарилпиримидинов с пирролидиновым фрагментом была основана на возможности использования в качестве основных строительных блоков производных 6-карбальдегиддиарилпиримидинов и 1-аминобут-3-ен-2-олов, которые можно задействовать в тандеме реакций аза-перегруппировки Коупа и реакции Манниха, что позволяет получить сфокусированную библиотеку новых диарилпиримидинов из коммерчески доступных веществ в минимальное количество стадий с использованием минимального количества хроматографических очисток. Ключевыми стадиями данного подхода явились: синтез производных 6-карбальдегиддиарилпиримидина (9 стадий с суммарным выходом 3%-4%), синтез производных 1-аминобут-3-ен-2-ола и итоговый синтез производных 6-(пирролидин-2-ил) диарилпиримидина с использованием стереоселективного тандема реакций аза-перегруппировки Коупа и Манниха. Простота всех стадий синтеза позволила получать производные диарилпиримидина в граммовых количествах (виде рацемата) и открывает широкие возможности для синтеза производных диарилпиримидина (в том числе, и в энантиомерно чистой форме). Относительная конфигурация 4-((6-(4-ацетил-4-метилпирролидин-2-ил)-2-((4-цианофенил)амино)пиримидин-4-ил)окси)-3,5-диметил-бензонитирила была доказана с помощью суммирования данных полученных из экспериментов ЯМР 1H, 13C, APT (Attached Proton Test), HMQC (Heteronuclear Multiple-Quantum Correlation), COSY (Correlation Spectroscopy) и NOESY (Nuclear Overhauser Effect Spectroscopy). Список литературы: 1. Belov D.S., Lukyanenko E.R., Kurkin A. V., Yurovskaya M. A., Highly stereoselective and scalable synthesis of trans-fused octahydrocyclohepta[b]pyrrol-4(1H)-ones via the aza-Cope−Mannich rearrangement in racemic and enantiopure forms. // J. Org. Chem., 2012, 77 (22), 10125–10134. 2. Usach I., Melis V., Peris J.-E. Non-nucleoside reverse transcriptase inhibitors: a review on pharmacokinetics, pharmacodynamics, safety and tolerability. // Journal of the International AIDS Society. – 2013. – Vol. 16, № 1. ‒ P. 1–14. 3. Natarajan S. et al. Atropisomerism in Rilpivirine hydrochloride: Spectroscopic characterization of Rilpivirine and related impurities // Chirality. – 2018. – Vol. 30, № 8. ‒ P. 966–973. 4. Else L.J. et al. Quantification of rilpivirine in human plasma, cervicovaginal fluid, rectal fluid and genital/rectal mucosal tissues using liquid chromatography-tandem mass spectrometry // Bioanalysis. – 2014. – Vol. 6, № 14. ‒ P. 1907–1921. 5. Kumar K.R., Suneetha A., Srilakshmi N. A validated LC Method for the Estimation of Rilpivirine in API and Pharmaceutical Dosage form // Journal of Pharmacy Research. – 2012. – Vol. 5, № 8. ‒ P. 4434–4436. 6. Date A.A. et al. Development and validation of a simple and isocratic reversed-phase HPLC method for the determination of rilpivirine from tablets, nanoparticles and HeLa cell lysates // Biomedical Chromatography. – 2015. – Vol. 29, № 5. ‒ P. 709–715. 7. Shibata M. et al. Development and application of a simple LC-MS method for the determination of plasma rilpivirine (TMC-278) concentrations // Journal of Medical Investigation. – 2013. – Vol. 60, № 1–2. ‒ P. 35–40. 8. ОФС.1.1.0008.15. Остаточные органические растворители [Electronic resource] // Государственная фармакопея Российской Федерации. XIII изд. Т. I. URL: https://pharmacopoeia.ru/ofs-1-1-0008-15-ostatochnye-organicheskie-rastvoriteli/ (accessed: 20.12.2020). 9. Гребёнкин Д.Ю., Станишевский Я.М., Шохин И.Е. Современные подходы к проведению сравнительного теста кинетики растворения (обзор) // Разработка и регистрация лекарственных средств. – 2016. – Vol. 1. ‒ P. 166–171. 10. Stokbroekx S.C.M. CRYSTALLINE FORM OF 4-4-4-(2-CYANOETHENYL)-2,6-DIMETHYLPHENYL-AMINO-2-PYRIMIDINYLAMINOBENZONITRILE: pat. 2010/0189796 A1 USA. US, – 2010. 11. Watanabe T., Ono T., Kimura Y. Continuous fabrication of monodisperse polylactide microspheres by droplet-to-particle technology using microfluidic emulsification and emulsion-solvent diffusion // Soft Matter. – 2011. – Vol. 7, № 21. ‒ P. 9894–9897. 12. Ульянова Ю.В. et al. ВЛИЯНИЕ ПАРАМЕТРОВ МИКРОФЛЮИДНОГО ПРОЦЕССА НА ХАРАКТЕРИСТИКИ МИКРОСФЕР НА ОСНОВЕ ВЫСОКОМОЛЕКУЛЯРНОГО СОПОЛИМЕРА МОЛОЧНОЙ И ГЛИКОЛЕВОЙ КИСЛОТ // Успехи в химии и химической технологии. – 2019. – Vol. 33, № 3(213). ‒ P. 44–46. | ||
3 | 1 января 2022 г.-31 декабря 2022 г. | Поиск новых ненуклеозидных антиретровирусных препаратов и изучение подходов к созданию их инъекционных депо-форм на основе микросфер PLGA с применением математического анализа кинетики высвобождения |
Результаты этапа: План работ на 2022 г. по выполнению проекта включал в себя продолжение работ по синтезу производных рилпивирина, модифицированных по 5-му (или 6-му) положению диарилпиримидинового ядра, установление строения полученных соединений, создание сфокусированной библиотеки малых молекул, разработка и оптимизация методов получения микросфер на основе PLGA, содержащих рилпивирин, установление параметров процесса получения микросфер, влияющих на основные характеристики депо-форм, нагруженных рилпивирином, выбор оптимального метода получения полилактидных микросфер, нагруженных рилпивирином; анализ физико-химических свойств микросфер PLGA, нагруженных рилпивирином (размер, распределение по размерам, морфология поверхности, содержание рилпивирина, эффективность включения); изучение кинетики высвобождения рилпивирина из полученных микросфер in vitro в различных средах, установление влияния различных факторов (в том числе размер микросфер, распределение по размерам, степень включения) на профиль высвобождения in vitro. В результате выполнения работ в 2022 г была проведена оптимизация основных стадий синтеза, изучение возможности использования производных диарилпиримидинов в тандемных реакциях и изучено пространственное строение синтезированных молекул. Дополнительно, был проведен молекулярный докинг базы синтезированных соединений, изучены основные критерии связывания молекул в сайте обратной транскриптазы. Ряд перспективных соединений был протестирован на противовирусную активность в ФБУН ГНЦ ВБ «Вектор» Роспотребнадзора в отношении вирусных ферментов. Идея синтеза производных диарилпиримидинов с пирролидиновым фрагментом была основана на возможности использования в качестве основных строительных блоков производных 6-карбальдегиддиарилпиримидинов и 1-аминобут-3-ен-2-олов, которые можно задействовать в тандеме реакций аза-перегруппировки Коупа и реакции Манниха, что позволяет получить сфокусированную библиотеку новых диарилпиримидинов из коммерчески доступных веществ в минимальное количество стадий с использованием минимального количества хроматографических очисток. Ключевыми стадиями данного подхода явились: синтез производных 6-карбальдегиддиарилпиримидина (9 стадий с суммарным выходом 3%-4%), синтез производных 1-аминобут-3-ен-2-ола и итоговый синтез производных 6-(пирролидин-2-ил) диарилпиримидина с использованием стереоселективного тандема реакций аза-перегруппировки Коупа и Манниха. Простота всех стадий синтеза позволила получать производные диарилпиримидина в граммовых количествах (виде рацемата) и открывает широкие возможности для синтеза производных диарилпиримидина (в том числе, и в энантиомерно чистой форме). Относительная конфигурация 4-((6-(4-ацетил-4-метилпирролидин-2-ил)-2-((4-цианофенил)амино)пиримидин-4-ил)окси)-3,5-диметил-бензонитирила была доказана с помощью суммирования данных полученных из экспериментов ЯМР 1H, 13C, APT (Attached Proton Test), HMQC (Heteronuclear Multiple-Quantum Correlation), COSY (Correlation Spectroscopy) и NOESY (Nuclear Overhauser Effect Spectroscopy). |
Для прикрепления результата сначала выберете тип результата (статьи, книги, ...). После чего введите несколько символов в поле поиска прикрепляемого результата, затем выберете один из предложенных и нажмите кнопку "Добавить".