ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
|
ФНКЦ РР |
||
Одна из главных задач, стоящих перед рибосомой при инициации трансляции – выбор правильного кодона для начала синтеза белка. У эукариот известно несколько механизмов такого выбора: наряду с классическим сканированием, в котором задействован набор канонических факторов инициации трансляции, некоторые вирусные мРНК могут использовать альтернативные пути и неканонические белковые факторы. Функция этих факторов, как и сами альтернативные механизмы инициации трансляции, изучены очень слабо. Большие споры вызывает также вопрос о том, существуют ли среди клеточных транскриптов такие мРНК, которые способны образовывать инициаторные комплексы по нестандартному пути, и если да, то в каких условиях эти механизмы работают в клетке. Более того, даже классическое сканирование, принципы которого в основном понятны, также нельзя считать изученным в достаточной степени. У эукариот известен целый ряд белковых факторов, которые взаимодействуют с классическим трансляционным аппаратом, но чей эффект на выбор стартового кодона никогда не изучался. В рамках данного проекта мы планируем расширить наши знания по этой теме. В системе in vitro мы собираемся провести анализ влияния второстепенных компонентов инициаторного комплекса на выбор AUG-кодона при классическом рибосомном сканировании и альтернативных путях инициации.
Первый год выполнения проекта нам пришлось потратить в основном на подготовительнуб работу: выделение белков, создание конструкций и прочее. Подробности изложены в отчёте, направленном в РФФИ. Второй год работы над проектом мы посвятили пяти основным темам: во-первых, мы проанализировали требования мРНК с TISU-контекстом AUG-кодона к факторам инициации трансляции eIF1 и eIF5 в системах in vitro и in vivo; во-вторых, завершили формирование «панели» эффектов различных клеточных стрессов на трансляцию трансфицированных мРНК с разными 5’-НТО; в-третьих, исследовали феномен смещения старта трансляции мРНК JunB на вышерасположенный CUG-кодон; в-четвёртых, осуществили «рибосомный профайлинг» штамма дрожжей, несущих делеции генов ТМА64, ТМА20 и двойную делецию (tma64/tma20), сравнив профиль трансляции с таковым для штамма дикого типа; в-пятых, завершили исследование феномена релокализация белка eIF2D на центросому в клетках млекопитающих в условиях окислительного стресса. Кроме того, наш коллектив участвовал в нескольких совместных проектах, темы которых сильно перекрываются с тематикой данного гранта (в частности, в проектах по анализу влияния коротких uORF на трансляцию мРНК генов SLAMF1 и TRPM7). Третий год был посвящён анализу данных рибосомного профайлинга мутантных дрожжевых штаммов и исследованию функций белков на репортёрных конструкциях. "Работы по проекту выполнялась во внерабочее время" (с)
грант РФФИ |
# | Сроки | Название |
1 | 28 марта 2013 г.-31 декабря 2013 г. | Белковые факторы, участвующие в выборе стартового кодона при инициации трансляции у эукариот в норме и при клеточном стрессе |
Результаты этапа: Изучены белковые факторы, участвующие в выборе стартового кодона при инициации трансляции у эукариот в норме и при клеточном стрессе | ||
2 | 28 марта 2014 г.-31 декабря 2014 г. | Белковые факторы, участвующие в выборе стартового кодона при инициации трансляции у эукариот в норме и при клеточном стрессе |
Результаты этапа: Изучены белковые факторы, участвующие в выборе стартового кодона при инициации трансляции у эукариот в норме и при клеточном стрессе | ||
3 | 30 марта 2015 г.-31 декабря 2015 г. | Белковые факторы, участвующие в выборе стартового кодона при инициации трансляции у эукариот в норме и при клеточном стрессе |
Результаты этапа: |
Для прикрепления результата сначала выберете тип результата (статьи, книги, ...). После чего введите несколько символов в поле поиска прикрепляемого результата, затем выберете один из предложенных и нажмите кнопку "Добавить".