ИСТИНА

Данный проект будет выполняться в рамках задач совместной лаборатории (МАЛ) LIA1066. В рамках проекта предполагается провести несколько групп экспериментов, часть из которых будет выполняться французским партнером. Общей целью предлагаемого к выполнению проекта является изучение механизмов, ответственных за возникновение лейкозогенных хромосомных транслокаций. В качестве целей отдельных этапов предлагаемой к выполнению работы можно обозначить получение ответов на следующие вопросы: Находятся ли гены AML1 и ETO во время перемещения в пространстве ядра, вызванного ингибированием ДНК-топоизомеразы II, в «структурно целом», либо «разорванном» состоянии? Покидают ли гены AML1 и ETO в процессе релокализации пределы соответствующих им хромосомных территорий, если да, то какова динамика этого процесса? Вызывает ли аналогичные эффекты ингибирование ДНК-топоизомеразы I, либо ингибирование ДНК-топоизомеразы II агентом, не приводящим к увеличению числа двухцепочечных разрывов ДНК в ядре? Какие ядерные белковые факторы (моторы: актин, ядерный миозин; белки семейства Rad и т.п.) либо процессы (например, активная репликация исследуемых локусов) ответственны за процесс релокализации генов AML1, ETO и MLL?

В ходе выполнения проекта мы ставили перед собой следующие задачи – определить частоту внесения двухцепочечных разрывов в ДНК генов AML1, ETO и MLL при обработке клеток линии Jurkat различными топоизомеразными ядами, а также проанализировать пространственное расположение концов таких разрывов относительно хромосомных территорий, соответствующим данным генам (21,11 и 8). Также ставилась задача определить - есть ли связь между нахождением ДНК генов в разорванном состоянии и вероятностью выхода концов такого разрыва за пределы соответствующей хромосомной территории. В результате выполнения проекта нами было показано следующее: 1. обработка клеток линии Jurkat этопозидом приводит к возникновению двухцепочечных разрывов ДНК внутри области BCR генов MLL и AML1 и к расхождению образовавшихся концов ДНК в пространстве ядра. Обработка клеток линии Jurkat камптотецином не приводит к возникновению двуцепочечных разрывов внутри области BCR гена MLL 2. концы двухцепочечных разрывов ДНК, возникающих внутри области BCR генов MLL и AML1, значительно чаще локализуются за пределами соответствующих хромосомных территорий по сравнению с неразорвавшимися аллелями данных генов 3. обработка клеток Jurkat этопозидом приводит к повышению доли неразорвавшихся аллелей генов MLL и AML1, которые локализованы вне пределов соответствующих данным генам хромосомных территорий 4. Ингибирование Rad51 или Mre11 не меняет данного соотношения