| Результаты этапа: Были подобраны условия длительного (до 12 суток) культивирования эксплантированных первичных фолликулов яичника мыши, инкапсулированных в альгинатный гидрогель. Показано, что первичные фолликулы, имеющие в первый день культивирования диаметр 130 мкм и менее, обладают меньшей жизнеспособностью, чем фолликулы большего диаметра.
При оплодотворении размороженных ооцитов мыши, предварительно криоконсервированных с использованием ряда витрификационных сред, методом ИКСИ не удалось получить значительного процента развивающихся зигот.
При различных вариантах сокультивирования эпителиальных и мезенхимных клеток 3D условиях показано формирование единого сфероида с 2-4 слоями эпителиальных клеток на поверхности и внутренней областью неполярных мезенхимных клеток. Методом цейтраферной (time-lapse) микроскопии прослежена динамика формирования сфероида. С помощью цейтраферной (time-lapse) микроскопии получены новые данные о динамике пролиферации первичных культур клеток эпителиального и мезенхимного фенотипов, а также исследован процесс хэтчинга бластоцист мыши in vitro: проанализированы скорость пульсации бластоцист и темпы формирования отверстия в блестящей оболочке.
птимизирован протокол дифференцировки клеток слюнной железы (КСЖ) мыши в панкреатическом направлении, в ходе которой возрастает экспрессия генов транскрипционных факторов, необходимых для формирования бета-клеток (Pdx1, Nkx2.2, Pax6, Hnf-6) и снижается экспрессия генов, необходимых для формирования протоков (Hes1) и ацинусов (Ptf1a). После воздействия вальпроевой кислоты (VPA) - ингибитора гистоновых деацетилаз, - в КСЖ уровни экспрессии гепатоцитарных ядерных факторов практически не изменяются, но возрастает экспрессия маркеров ранней гепатоцитарной дифференцировки (AFP, 1AAT, TAT), маркеров гепатоцитов (ALB, TDO) и цитохрома P450 7A1, а также генов, регулирующих клеточную миграцию (Hhex1 и Tbx3), тогда как уровень экспрессии маркера клеток протоков цитокератина 19 (CK19) снижается
ри исследовании регенерационного потенциала пигментной системы покровов холоднокровных продемонстрирована отчетливое влияние вторичных физиологических реакций меланофоров на динамику репарации поврежденного участка как за счет пролиферации зрелых меланофоров, так и за счет дифференцировки меланобластов (в основном). Дифференцирующиеся меланофоры всегда меньшего размера, и их плотность выше, особенно у личинок, содержащихся на белом фоне. Выявлена специфика регенерационного процесса у личинок разных стадий развития. Измерено содержание мелатонина и некоторых ключевых стероидных горонов (тестостерона, кортикостерона и альдостерона) у личинок в 1-е и 5-е сутки после операции. Концентрация всех гормонов, кроме альдостерона, значительно повышена у личинок оперированной группы по сравнению с контрольной, хотя временная динамика изменений различна.
При исследовании возможности коррекции патологических изменений печени мышей (индуцированный фиброз, острое токсическое повреждение) показано, что трансплантация аутологичных клеток стромально-васкулярной фракции жировой ткани (СВФ ЖТ) мышам с острым токсическим повреждением способствует значительному снижению очагов некроза в областях центральных вен дольки печени, однако, сопровождается появлением различного рода дистрофий гепатоцитов. Отработана методика трансплантации клеток СФВ ЖТ в хвостовую вену мыши, подобраны оптимальные объем вводимой фракции клеток (100 мкл) и оптимальное количество клеток ( 5000000 кл/мл). Установлено, что внутрибрюшинное введение комплекса факторов среды, кондиционированной мезенхимными стромальными клетками жировой ткани, значительно ускоряет репарацию печени мыши после индуцированного фиброза – наблюдается снижение некротических очагов и уровня дистрофии гепатоцитов, по сравнению с контрольной группой.
Сопоставлен гепатопротекторный потенциал мембранотропных гомеостатических тканеспецифических биорегуляторов (МГТБ), выделенных из печени крысы, при действии на динамику развития токсического повреждения в течение 60 суток и на регрессию фиброза в течение последующих 30 суток. Показано, что на первых этапах развития токсического повреждения (30- 45-е сутки эксперимента) не было выявлено гистоморфологических различий печени мышей опытных и контрольных групп. На 60-е сутки в печени мышей, которым вводили МГТБ , значительно замедлялись темпы развития фиброза по сравнению с контрольной группой. Установлено, что МГТБ способствуют регрессии фиброза в период посттоксической репарации печени. При роллерном органотипическом культивировании печени мыши в течение 21-го дня прослежена динамика деградации эксплантатов и установлено, что МГТБ, выделенные из печени крысы и сыворотки крови крупного рогатого скота значительно замедляют процессы деградации.
Обнаружена стадиоспецифичная чувствительность эмбрионов вьюна к воздействию низкоинтенсивного электромагнитного излучения видимого и КВЧ диапазона, а также установлено, что выживаемость эмбрионов при облучении на одной и той же стадии зависит от длины волны (при одинаковой мощности излучения). Так икра, облучённая во время дробления, показала снижение жизнеспособности по сравнению с контролем, причём эффект становился более выраженным при уменьшении длины волны (на 470 нм жизнеспособных зародышей было в среднем на 15% меньше, чем в контроле). Для икры, облучённой на стадии средней бластулы, было показано наличие как стимулирующего действия, выраженного в увеличении жизнеспособности (на 25% при 630 нм и на 15% при 660 нм), так и снижение жизнеспособности на 10-15% при 7,1 мм и 470 нм. Показано, что воздействие низкоинтенсивного электромагнитного излучения КВЧ спектра (длина волны 7,1 мм ; непрерывный режим 4 мВт/см2 и импульсный 8 Гц, 2 мВт/см2) приводило к увеличению числа кератиноцитов HaCat in vitro до 1,5 раз по сравнению с контролем, но к угнетению пролиферативной активности мезенхимных стволовых клеток крысы на 10-15%. При непрерывном режиме облучения кератиноцитов какого-либо статистически значимого эффекта не обнаружено, в то время как число МСК увеличилось на 20%. После облучения культур при разном времени экспозиции (от 10 до 300 сек.) обнаружены дозозависимые максимумы и минимумы изменения числа клеток при экспозиции 30 и 150 сек.
Подтверждено представления о механизмах участия свободнорадикальных процессов в определении клеточного ответа при биологических эффектах слабых электромагнитных воздействий, представляющих возможный экологический риск для репродуктивного материала и развивающихся организмов.
Собран материал для анализа стабильных изотопов биогенных элементов в организме Rana arvalis на личиночной стадии развития и поступающих с пищей. Показано, что существование личинок Rana arvalis, обеспечивается: 1) ферментацией целлюлозы микроорганизмами в нижних отделах кишечника, и 2) копрофагией, в результате которой в изобилии размножившиеся кишечные микроорганизмы перевариваются и ассимилируются в верхних отделах кишечника. Механизм такого рода позволяет выживание организмов на чрезвычайно бедном питательными веществами субстрате (детрите).
|
