Изучение структуры и выражения вирусных геномовНИР

Источник финансирования НИР

госбюджет, раздел 0110 (для тем по госзаданию)

Этапы НИР

# Сроки Название
1 1 января 2014 г.-31 декабря 2014 г. Изучение структуры и выражения вирусных геномов
Результаты этапа: Изучены особенности формирования транспортных форм вирусных нуклеопротеидов (вРНП), обеспечивающих распространение вирусной инфекции по растению. В рамках работы по поиску сигнала или необходимого структурного элемента, влияющего на упаковку вирусного генетического материала вРНП, ранее было показано, что присутствие кэп-структуры на 5´-конце нуклеиновой кислоты является важным условием для образования вРНП из вирусной РНК и вирусного белка оболочки (БО) Х-вируса картофеля (ХВК). Было предположено, что кэппирование нуклеиновой кислоты оказывает влияние на создание конформационного сигнала инкапсидации при формировании вРНП. На данном этапе показано, что кэп-структура может быть удалена с предварительно кэпированной молекулы РНК, и это не влияет на возможность и эффективность формирования вРНП. Более того, эффективность сборки вРНП (количество образовавшихся частиц) не падает при декэпировании РНК. Это подтверждает предположения, высказанные ранее, что кэп-структура не является сигналом для инициации формирования вРНП сама по себе. По-видимому, конформационное состояние 5'-конца молекулы, возникающее при кэпировании РНК, является крайне стабильным, и после удаления кэп-структуры конформационный сигнал инкапсидации необходимый для формирования вРНП не изменяется. Изучены особенности некоторых вирусных и клеточных белков, важных для формирования структуры вируионов и влияющих на патогенность вирусов в растениях. Проведены исследования по изучению роли белка р42, ген которого обнаружен в геноме нитевидного аллексивируса – Х-вируса шалота (ХВШ). Показано, что белок, соответствующий по электрофоретической подвижности рекомбинантному белку р42. присутствует в зараженных ХВШ растениях, а в очищенных вирусных препаратах ХВШ присутствует реагирующий с антисывороткой к р42 белок с большей электрофоретической подвижностью (37кДа), по-видимому, за счет частичного протеолиза при выделении вирусного препарата. Методом иммуноэлектронной микроскопии была изучена локализацию белка p42 в составе вирионов ХВШ. Показано, что мечение белка р42 в вирусных частицах является преимущественно специфическим, и что р42 входит в структуру вириона либо являясь компонентом белковой спирали, образованной белком оболочки ХВШ, либо периферически взаимодействуя с вирионами. Продолжено изучение белка Nt-4/1, роль которого в жизнедеятельности растения до сих пор остается неясной. Впервые обнаружено, что белок Nt-4/1 in vitro образует рибонуклеопротеидные комплексы с разными формами РНК, причем с большей эффективностью с РНК, богатыми шпилечными структурами и выпетливаниями. Обнаружен участок связывания - положительно заряженная, кодируемая последним экзоном гена, наиболее консервативная область в C-терминальном домене белка. Получены результаты, свидетельствующие в пользу того, что белок Nt-4/1 образует рибонуклеопротеидные комплексы в клетках проводящего пучка и негативно влияет на распространение по растению вироида веретеновидности клубней картофеля (ВВКК). Проанализирована структура белка Nt-4/1 с помощью компьютерной программы COFACTOR, отбирающей белки со схожими укладками и подобными функциональными доменами и сайтами. Выявлено сходство белка Nt-4/1 и РНК-связывающего белка Saccharomyces cerevisiae She2p. Полученные данные свидетельствует в пользу того, что взаимодействие белка Nt-4/1 с РНК ВВКК, вероятно, происходит примерно также, как и у белка She2p, то есть путем узнавания одноцепочечных выпетливаний и шпилек в дуплексе РНК, однако взаимодействие белка Nt-4/1 с РНК является неспецифичным, поскольку Nt-4/1 также образует комплексы с РНК-субстратами, лишенными таких структур, хотя и с меньшей эффективностью. Изучены функции ядерного белка коилина. Впервые показано, что коилин принимает участие в развитии инфекции растений вирусами различных таксономических групп, усиливая или, напротив, ослабляя патогенность вируса. Изучены характеристики инфекции трансгенных растений с подавленной экспрессией гена коилина при заражении тобравирусом и гордеивирусом. Продолжено изучение репликативного полипротеина 1а вируса желтухи свеклы (ВЖС). Показано, что он содержит гидрофобный домен CR-2, вызывающий при его экспрессии в растениях деградацию эндоплазматического ретикулюма и образование подвижных глобул диаметром 2 мкм. Проведен делеционный анализ "глобуло-образующего" домена CR-2 белка 1а (позиции 1305-1494 белка 1а). Показано, что изученные делеционные варианты сохраняют фенотип дикого типа CR-2 (образование глобул и реструктуризация ЭР вокруг ядра клетки). Получены данные по электронной микроскопии клеток Nicotiana benthamiana, экспрессирующих слитный белок GFP–CR-2. Установлено, что при экспрессии в растениях бинарной конструкции GFP–CR-2 вокруг ядер образуются мультивезикулярные комплексы (одиночные везикулы, окруженные общей мембраной), которые не обнаруживались в неинокулированных
2 1 января 2015 г.-31 декабря 2015 г. Изучение структуры и выражения вирусных геномов
Результаты этапа:

Прикрепленные к НИР результаты

Для прикрепления результата сначала выберете тип результата (статьи, книги, ...). После чего введите несколько символов в поле поиска прикрепляемого результата, затем выберете один из предложенных и нажмите кнопку "Добавить".