|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ФНКЦ РР |
||
Изучение экспрессии генома и функций белков Х-вируса шалотаНИР
- Руководитель НИР: Морозов С.Ю.
- Участники НИР: Гущин В.А., Лезжов А.А., Макаров В.В., Соловьев А.Г.
- Подразделение: Отдел биохимии вирусов растений
- Срок исполнения: 1 января 2013 г. - 31 декабря 2015 г.
- Номер договора (контракта, соглашения): 13-04-00667
- Тип: Фундаментальная
- Приоритетное направление научных исследований: другое
-
Рубрики ГРНТИ:
- 34.25.21 Генетика вирусов
- 34.25.29 Биология вирусов человека, животных, растений и бактерий
-
Ключевые слова:
взаимодействие вирус-хозяин, вирусы растений, (+)рнк-содержащие вирусы, экспрессия вирусных генов, функции вирусных белков
-
Описание:
Род Allexivirus объединяет вирусы растений, для которых характерны гибкие нитевидные вирионы, содержащие геномную РНК положительной полярности. Организация генома аллексивирусов сходна с таковой потексвирусов и карлавирусов, но имеет ряд уникальных черт, которые включают присутствие гена белка р42, функция которого неизвестна, и гена транспортного белка ТБГ3, не имеющего инициаторного кодона. Основные данные, накопленные об аллексивирусах, касаются первичной структуры их геномной РНК, в то время как их молекулярная биология остается практически неизученной. Типовым аллексивирусом является Х-вирус шалота (ХВШ). Целью данного проекта является охарактеризовать на молекулярном уровне экспрессию генома ХВШ и функции кодируемых им белков, участвующих во взаимодействии с растением-хозяином. Рабочий план включает следующие экспериментальные задачи: идентификация белка-супрессора РНК-сайленсинга, кодируемого ХВШ; картирование субгеномных РНК ХВШ; анализ молекулярного механизма экспрессии гена ТБГ3 ХВШ; изучение внутриклеточной локализации белков ХВШ; анализ экспрессии и функций белка р42; анализ функций цистеин-богатого белка ХВШ; получение полной инфекционной кДНК-копии генома ХВШ.
- Добавил в систему: Морозов Сергей Юрьевич
Источник финансирования НИР
| грант РФФИ |
Этапы НИР
| # | Сроки | Название |
| 2 | 1 января 2014 г.-31 декабря 2014 г. | Изучение экспрессии генома и функций белков Х-вируса шалота |
| Результаты этапа: В ходе исследований был изучен молекулярный механизма экспрессии гена ТБГ3 ХВШ. Оказалось, что синтез этого белка осуществляется в составе бицистронной матрицы, где ген ТБГ2 предшествует ТБГ3. При этом неоптимальный инициаторный кодон и отсутствие других инициаторных триплетов у ТБГ2 гена способствует проскоку сканирующей рибосомы до АУГ кодона ТБГ3. Были проведены исследования экспрессии белка р42, кодируемого геномом ХВШ, и его способности взаимодействовать с вирионами ХВШ. В вирусном препарате был обнаружен один белок, который специфически взаимодействовал с сывороткой к рекомбинантному р42, но имел большую подвижность в геле, чем полноразмерный белок, которая соответствовала молекулярной массе около 37 кДа. Меньший размер белка, обнаруживаемого в препарате вируса, может говорить о том, что при выделении вирусного препарата происходит частичный протеолиз белка р42. Локализацию белка p42 в составе вирионов ХВШ проводили методом иммуноэлектронной микроскопии. Электронная микроскопия полученных препаратов показала специфическое мечение вирионов. В обоих случаях связанные с антителами частицы золота располагались вдоль всей длины вирионов ХВШ. Показано, что репликационная хеликаза ХВШ и белок оболочки ХВШ неспособны супрессировать РНК-сайленсинг в системе временной экспрессии в листьях растений. Проведен ряд стадий молекулярного клонирования для создания полноразмерной инфекционной кДНК-копии генома ХВШ. | ||
| 3 | 1 января 2015 г.-31 декабря 2015 г. | Изучение экспрессии генома и функций белков Х-вируса шалота |
| Результаты этапа: На основе генетической конструкции, полученной на предыдущем этапе работ по проекту, была сконструирована полная кДНК-копия генома ХВШ под контролем растительного промотера Act2. Экспрессионная кассета, включающая кДНК-копию генома ХВШ, была перенесена в бинарный вектор, и полученной конструкцией трансформировали клетки A.tumefaciens. Инфекционность кДНК-копия генома ХВШ тестировали путем агроинфильтранции различных растений-хозяев. Было показано, что репликация ХВШ происходит в агроинфильтрированной ткани листьев Nicotiana megalosiphon. Была получена генетическая конструкция для экспрессии белка оболочки (БО) ХВШ в бактериальных клетках. Полученный очищенный препарат рекомбинантного БО использовали для анализа структуры белка на основе измерения кругового дихроизма. Полученные данные свидетельствуют о том, что альфа-спиральные участки составляют около 60% БО ХВШ. | ||
Прикрепленные к НИР результаты
Для прикрепления результата сначала выберете тип результата (статьи, книги, ...). После чего введите несколько символов в поле поиска прикрепляемого результата, затем выберете один из предложенных и нажмите кнопку "Добавить".