| 1 |
1 января 2015 г.-31 декабря 2015 г. |
Структурные исследования природно развернутого белка: белка оболочки А вируса картофеля |
| Результаты этапа: Предсказаны методами биоинформатики и обнаружены рядом физико-химических подходов (КД и РАМАН спектроскопия, флюоресценция и т.д.) амилоидные свойства у белка оболочки вируса картофеля А при нагревании препарата вируса и у свободного белка в растворе. |
| 2 |
1 января 2016 г.-31 декабря 2016 г. |
Природно развернутый белок с амилоидными свойствами: белок оболочки А вируса картофеля |
| Результаты этапа: Поскольку нами была показана склонность к ассоциации изолированного белка АВК, в 2016 г мы сосредоточились на поиске способов диссоциации, во-первых, путем изменения ионной силы и рН раствора и, во-вторых, действием сульфатированных полианионов или анионных детергентов. Для анализа структуры мы использовали метод малоуглового рентгеновского рассеяния (SAXS) – современный и быстроразвивающийся метод анализа структуры низкого разрешения и формы биологических макромолекул в растворе (Shtykova et al.,2013). Благодаря финансовой поддержке нашего гранта РФФИ эксперименты по анализу структур методом SAXS были проведены на синхротроне PETRA III (DESY, Европейская лаборатория молекулярной биологии, EMBL, Гамбург). Полученные вирусоподобные частицы (ВПЧ) с разной степенью ассоциации охарактеризованы также ограниченным трипсинолизом с последующим MALDI-TOF масс-спектроскопическим анализом фрагментов в геле, позволяющим оценить поверхностное и/или разупорядоченное состояние участков полипептидной цепи. Результаты исследований доложены на вирусологическом и кристаллографических конгрессах (двух международных и одном Российском). |
| 3 |
1 января 2017 г.-31 декабря 2017 г. |
Структурное исследование вирусоподобных частиц, вирионов и амилоидоподобных агрегатов белка оболочки А вируса картофеля |
| Результаты этапа: Продолжено структурное исследование вирусоподобных частиц (ВПЧ), образуемых потивирусом (АВК), потексвируса методом малоуглового рентгеновского рассеяния (SAXS). Интерпретацию данных и моделирование проведены с использованием новейших программ, разработанных в Европейской лаборатории молекулярной биологии (EMBL), Гамбург Германия
Проведен структурный анализ ряда спиральных растительных вирусов разных семейств: АВК (поти-) и вируса картофеля Х (ХВК) потексвирусы) методом малоуглового рентгеновского рассеяния. Проведено предварительное моделирование их структуры
Начато структурное моделирование белка оболочки вируса картофеля Х, используя данные тритиевого мечения интактных вирионов и данные, полученные гомологичным моделированием.
Продолжено исследования свойств амилоидоподобных агрегатов, наночастиц АВК, полученных термической обработкой вирусов. Проведены пробные эксперименты по тритиевому мечению наночастиц и анализу доступной тритию поверхности.
Результаты доложены на 2-х международных конференциях и опубликованы в большой статье. |
