ИСТИНА

Целью данного проекта является изучение мономолекулярных взаимодействий полиолигонуклеотидных цепей на поверхности различных носителей с использованием наноструктур золота в качестве метки методами сканирующей электронной микроскопии и атомно-силовой микроскопии. В ходе работы предполагается исследовать эффективность выявления ДНК на поверхности различных носителей с использованием наноструктур золота (наночастиц, нанооболочек - структур на основе силикатного ядра и золотых внешних сфер) методами сканирующей электронной микроскопии и атомно-силовой микроскопии, исследовать влияние структуры и способа введения метки на процессы гибридизации олигонуклеотидных зондов с ДНК, изучить влияние точечных замен нуклеотидов, нуклеотидного состава на эффективность реакции гибридизации, создать молекулярные детекторы ДНК для идентификации генов и мутаций в них.

Впервые разработан метод гибридизационного анализа на микрочипах из кремния с использованием наночастиц золота в качестве метки, в котором детекция производится подсчетом числа наночастиц, зарегистрированных методом СЭМ. Было показано, что метод СЭМ обладает преимуществами в анализе единичных взиамодействий нуклеиновых кислот и олигонуклеотидов по сравнению с методом АСМ. К достоинствам разработанного метода следует отнести низкий уровень фонового сигнала, что позволяет существенно снизить предел обнаружения генов. Впервые разработан микрочип для идентификации генов бактериальных ферментов бета-лактамаз и определения мутаций в них на основе гибридизационного анализа и регистрации методом СЭМ. Особенностью метода является регистрация числа дуплексов ДНК на поверхности носителя, а не их концентрации. Число единичных взаимодействий ДНК на поверхности микрочипа соответствует числу наночастиц золота, которое выявляется методом СЭМ. Метод характеризуется высокой чувствительностью и специфичностью, а также высоким отношением аналитический сигнал/фон