Разработка ингибиторов никующей эндонуклеазы BspD6I на основе синтетических фрагментов ДНК

Абросимова, Л.А.; Мигур, А.Ю.; Кубарева, Е.А.; Венде, В.; Железная, Л.А.; Орецкая, Т.С.

Авторы: Абросимова Л.А., Мигур А.Ю., Кубарева Е.А., Венде В., Железная Л.А., Орецкая Т.С.
Журнал: Известия ВУЗов. Прикладная химия и биотехнология
Том: 2
Номер: 13
Год издания: 2015
Первая страница: 48
Последняя страница: 59
Аннотация: Никующие эндонуклеазы (НЭ), узнающие в двутяжевой ДНК специфические последовательности и вносящие разрыв в определенное положение только одной из цепей ДНК, нашли широкое применение в молекулярной биологии и генетической инженерии. НЭ представляют собой перспективные ферменты в качестве молекулярных инструментов для расщепления ДНК вблизи дефектного гена с целью его последующего «исправления». Отсутствие неспецифического гидролиза ДНК является ключевым требованием этого метода. Актуальной задачей является направленное регулирование активности НЭ, что предотвратит появление неконтролируемых разрывов в ДНК, приводящих к нежелательным последствиям для клетки. На примере НЭ BspD6I разработан подход, позволяющий «выключать» и «включать» фермент в заданный момент времени с помощью внешнего сигнала (изменение температуры) за счет использования термочувствительных аналогов субстрата. Сконструированы 13- и 15-звенные немодифицированные синтетические ДНК-дуплексы, которые блокируют активность фермента при 20 °С. Повышение температуры вызывает диссоциацию дуплексов-ингибиторов и приводит к инициации ферментативного гидролиза протяженной ДНК при ~ 40–50 °С. Предлагаемый подход может быть использован для оптимизации реакции изотермической амплификации ДНК с вытеснением цепи, а также для модулирования активности химерных нуклеаз, применяемых в генной терапии.
Добавил в систему: Никифорова Людмила Алексеевна

	ИСТИНА	Войти в систему Регистрация
	ФНКЦ РР
	Главная Поиск Статистика О проекте Помощь

ИСТИНА

ФНКЦ РР

Разработка ингибиторов никующей эндонуклеазы BspD6I на основе синтетических фрагментов ДНКстатья

Прикрепленные файлы