|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ФНКЦ РР |
||
Реактивация из телец включения HIF пролилгидроксилазы 2, экспрессированной в клетках E.coliстатья
Статья опубликована в журнале из списка RSCI Web of Science
Статья опубликована в журнале из перечня ВАК- Авторы: Хушпульян Д.М., Захарянц А.А., Смирнова Н.А., Мороз Н., Тишков В.И., Газарян И.Г.
- Журнал: Известия Академии наук. Серия химическая
- Том: 64
- Номер: 7
- Год издания: 2015
- Издательство: ФГБУ "Издательство "Наука"
- Местоположение издательства: Москва
- Первая страница: 1671
- Последняя страница: 1677
- Аннотация: HIF (фактор индуцируемый гипоксией) пролилгидроксилазы относятся к группе -кетоглутарат-зависимых негеминовых диоксигеназ, катализирующих гидроксилирование пролина в HIF. Клонирование каталитических доменов всех трех изоформ фермента (PHD1-3) в E.coli показало наивысший выход экспрессии для изоформы PHD2, причем основная масса белка экспрессировалась в виде нерастворимых телец включения. Для получения активной PHD2 была разработана процедура рефолдинга фермента из телец включения. Для оптимизации реактивации была разработана непрерывная методика регистрации активности фермента по окислению ферроцианида в присутствии HIF белка или пептида. Сравнение очищенных препаратов фермента из растворимой фракции с препаратами очищенной PHD2, полученной реактивацией из телец включения, показало в 4-5 раз более высокую специфическую активность последнего (5 мол/мин/мол) в реакции потребления -кетоглутарата, регистрируемой по флуоресцентной детекции аддукта кетоглутарата с орто-фенилендиамином. PHD2 отличает высокая гидрофобность и необходимость использования буферов высокой молярности для предотвращения аггрегирования и выпадения в осадок, а также быстрая инактивация в отсутствие дитиотрейтола (DTT).
- Добавил в систему: Тишков Владимир Иванович
Прикрепленные файлы
| № | Имя | Описание | Имя файла | Размер | Добавлен |
|---|---|---|---|---|---|
| 1. | Полный текст | RusChemBul_2015_64_N7_1671ru.pdf | 2,0 МБ | 28 августа 2015 [tishkov] |