Количественное определение генов бактериальных ферментов бета-лактамаз на кремниевых микрочипах методом сканирующей электронной микроскопии

Преснова, Г.В.; Рубцова, М.Ю.; Преснов, Д.Е.; Григоренко, В.Г.; Егоров, А.М.

Авторы: Преснова Г.В., Рубцова М.Ю., Преснов Д.Е., Григоренко В.Г., Егоров А.М.
Сборник: VIII МОСКОВСКИЙ МЕЖДУНАРОДНЫЙ КОНГРЕСС «БИОТЕХНОЛОГИЯ: СОСТОЯНИЕ И ПЕРСПЕКТИВЫ РАЗВИТИЯ»
Том: 3
Тезисы
Год издания: 2015
Место издания: ЗАО «Экспо-биохим-технологии», РХТУ им. Д.И. Менделеева, Москва
Первая страница: 3
Последняя страница: 4
Аннотация: Разработан количественный метод определения полноразмерных генов, кодирующих бактериальные ферменты бета-лактамазы, ответственных за развитие устойчивости бактерий к бета- лактамным антибиотикам. Определение генов проводится методом гибридизационного анализа с использованием наночастиц золота в качестве метки. В результате взаимодействия олигонуклеотидных зондов с ДНК-мишенью, меченой биотином, на поверхности микрочипа образовуются дуплексы ДНК, которые затем выявляются конъюгатом стрептавидина с наночастицами золота. Конъюгат стрептавидина с золотом получали методом ковалентного связывания с использованием меркаптоянтарной кислоты. Наночастицы на поверхности выявляли методом сканирующей электронной микроскопии (СЭМ). Определение числа дуплексов ДНК на поверхности проводили подсчетом числа наночастиц золота в зонах микрочипа. В ходе работы была проведена оптимизация условий гибридизационного анализа и статистической обработки экспериментальных данных. Проведено сравнительное изучение методов атомно-силовой микроскопии (АСМ) и СЭМ для исследования поверхностей кремния с иммобилизованными олигонуклеотидными зондами и дуплексами ДНК. Для контроля процессов, происходящих на поверхности, был применен метод анализа сколов образцов кремния методом СЭМ. Было установлено, что часть золотых наночастиц может быть погружена в приповерхностный слой носителя, что затрудняет применение метода АСМ, но не влияет на результаты, полученные методом СЭМ. Разработанный метод впервые применен для количественного определения полноразмерной ДНК бета-лактамаз разных типов. Предел обнаружения гена бета-лактамазы VIM-2 составил 25 рМ, гена бета-лактамазы CTX-M-5 – 5рМ. Разработанный метод характеризуется высокой чувствительностью и специфичностью, а также высоким отношением аналитический сигнал/фон.
Добавил в систему: Преснов Денис Евгеньевич

	ИСТИНА	Войти в систему Регистрация
	ФНКЦ РР
	Главная Поиск Статистика О проекте Помощь

ИСТИНА

ФНКЦ РР

Количественное определение генов бактериальных ферментов бета-лактамаз на кремниевых микрочипах методом сканирующей электронной микроскопиитезисы доклада

Прикрепленные файлы