|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ФНКЦ РР |
||
Структурно-функциональный анализ полиморфного участка в области рибосомных генов мтДНК оомицетовтезисы доклада
- Авторы: Малеева Ю.В., Чудаков Д.М., Колесников А.А.
- Сборник: Сборник трудов научной конференции ПРОБЛЕМЫ ЭКОЛОГИИ И ФИЗИОЛОГИИ МИКРООРГАНИЗМОВ
- Тезисы
- Год издания: 2000
- Место издания: Диалог-МГУ Москва
- Первая страница: 75
- Последняя страница: 75
- Аннотация: Предложена методика картирования области инициации репликации (ori) на примере митохондриального (мт) генома паразита пасленовых Phytophthorainfestans -представителя группы оомицетов. К настоящему времени ни для одного организма из этой большой группы не показан механизм и участок (участки) ori мт ДНК. Известен полный сиквенс мт ДНК P.infestans(Lang, Forget, 1993), что делает возможным тестирование выделенных и дифференцированных по размеру насцентных (растущих) цепей ДНК на содержание последовательно расположенных фрагментов генома. Такой подход уже показал свою эффективность (Muller & Grummt, 1991; Falaschi et al., 1993; Staib & Grummt, 1997). Новым в настоящей работе является предложенный метод очистки насцентных цепей: Суммарную ДНК разгоняют в 1.5% агарозном геле. При этом дробные фрагменты ДНК, составляющие конкуренцию при анализе насцентных цепей, выходят в гель в виде так называемого «шмера». Основная масса продукта локализуется в пределах узкой полосы ДНК, статистически порванной в процессе выделения (~30 тнп). Эта полоса содержит как обычные дуплексы ДНК, так и дуплексы, включающие растущую цепь ДНК. Фрагмент, содержащий суммарную ДНК, вырезают из обычного геля и переносят в денатурирующий (50-100mM NaOH). В щелочных условиях ДНК денатурирует, высвобождая насцентную цепь. Короткие насцентные цепи отделяются от основной массы ДНК, выходят в гель и разделяются по размеру. ДНК выделяют из участков геля электроэлюцией и тестируют на содержание последовательно расположенных фрагментов генома: Достоинствами предложенного метода являются его простота, универсальность, а также отсутствие необходимости в использовании радиоактивных изотопов и дорогостоящих систем очистки насцентных цепей ДНК с использованием антител.
- Добавил в систему: Малеева Юлия Владимировна