|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ФНКЦ РР |
||
Получение рекомбинантной формиатдегидрогеназы из термотолерантных дрожжей Ogataea parapolymorpha DL-1 и кристаллизация апо- и холо- форм ферментастатья
Статья опубликована в журнале из списка RSCI Web of Science
Статья опубликована в журнале из перечня ВАКСтатья опубликована в журнале из списка Web of Science и/или Scopus
Дата последнего поиска статьи во внешних источниках: 23 сентября 2021 г.
- Авторы: Пометун А.А., Бойко К.М., Зубанова С.А., Николаева А.Ю., Атрошенко Д.Л., Савин С.С., Тишков В.И.
- Журнал: Вестник Московского университета. Серия 2: Химия
- Том: 62
- Номер: 2
- Год издания: 2021
- Издательство: Издательский дом МГУ
- Местоположение издательства: Москва
- Первая страница: 130
- Последняя страница: 138
- Аннотация: NAD+-зависимая формиатдегидрогеназа из термотолерантных дрожжей Ogataea parapolymorpha DL-1 (OpaFDH, КФ 1.2.1.2) c дополнительным остатком глицина на N конце и ее двойной мутант OpaFDH_AD были экспрессированы в клетках E,coli c выходом более 6000 ед. активности с литра среды. Ферменты были очищены до гомогенного состояния с выходом 62%. Методика выделения включала разрушение клеток ультразвуком, термообработку бесклеточного экстракта при 55 оС в течение 15 мин и гидрофобную хроматографию на Phenyl Sepharose Fast Flow. Проведены эксперименты по кристаллизации как свободной OpaFDH, так и в присутствии субстрата NAD+ и конкурентного по формиату ингибитора азид-иона (апо- и холо-формы соответственно), однако были получены кристаллы только апо-формы фермента размером 50х50х20 мкм. Кристаллы холо-OpaFDH дикого типа получить не удалось. Поэтому далее для получения кристаллов холо-формы использовали мутантную OpaFDH_AD, в который по сравнению с исходным ферментом улучшены температурная и химическая стабильности. В результате для холо-форм OpaFDH_AD кристаллы были получены. Полученные кристаллы имеют достаточное качество для сбора дифракционных данных и последующего определения трехмерной структуры.
- Добавил в систему: Тишков Владимир Иванович
Прикрепленные файлы
| № | Имя | Описание | Имя файла | Размер | Добавлен |
|---|---|---|---|---|---|
| 1. | Полный текст | VestnikMSU_Ser-02_2021-2_130-138_true.pdf | 1,2 МБ | 19 апреля 2021 [tishkov] |