|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ФНКЦ РР |
||
Дизайн биосенсоров нуклеиновых кислот на основе систем CRISPR/Cas и репортерных сплит-белковстатья
Статья опубликована в журнале из списка RSCI Web of Science
Статья опубликована в журнале из перечня ВАК- Авторы: Новиков Роман вячеславович, Грибкова А.К., Качер Ю.Г., Зайцев П.А., Армеев Г.А., Глухов Г.С., Шайтан А.К.
- Журнал: Вестник Московского университета. Серия 16: Биология
- Том: 76
- Номер: 2
- Год издания: 2021
- Издательство: Изд-во Моск. ун-та
- Местоположение издательства: М.
- Первая страница: 67
- Последняя страница: 75
- Аннотация: Для диагностики многих болезней человека, животных и растений, мониторинга окру- жающей среды необходимы высокочувствительные, специфичные, быстрые и простые в использовании диагностические методы детекции нуклеиновых кислот патогенов. Альтернативой методу полимеразной цепной реакции, который требует дорогостоящего лабораторного оборудования, являются подходы, основанные на использовании есте- ственной способности бактериальных CRISPR/Cas9-систем к узнаванию последо- вательностей ДНК с высокой специфичностью в изотермических условиях. Разработка методов регистрации сигнала при образовании комплекса ДНК/РНК/Cas9-белок явля- ется отдельной биоинженерной задачей. В данной работе нами разработан дизайн и ис- следована применимость биосенсорной системы, основанной на связывании двух dCas9-белков с целевыми последовательностями ДНК (без их разрезания) и детекции их солокализации с помощью репортерных систем на основе сплит-ферментов. Методами молекулярного моделирования определены возможные взаимные расположения двух dCas9-белков на детектируемом локусе геномной ДНК, позволяющие оптимальным об- разом взаимодействовать присоединенным к ним доменам сплит-ферментов. Определе- ны оптимальные расстояния на ДНК между сайтами связывания dCas9-белков в различ- ной ориентации, смоделирована зависимость структуры комплекса от расстояния между сайтами связывания dCas9-белков. Методами биоинформатики проанализированы геномы ряда вирусов (включая SARS-CoV-2), показано наличие уникальных для вида геномных локусов, допускающих возможность посадки пар dCas9-белков в оптималь- ных положениях. Проанализирована возможность комбинированного использования dCas9-белков из различных бактерий для расширения спектра детектируемых локусов. Результаты работы свидетельствуют о принципиальной возможности создания высоко- специфичных биосенсоров нуклеиновых кислот на основе комбинации технологий CRISPR/Cas9 и сплит-ферментов.
- Добавил в систему: Шайтан Алексей Константинович
Прикрепленные файлы
| № | Имя | Описание | Имя файла | Размер | Добавлен |
|---|