Catalytic asymmetry in homodimeric H+‐pumping membrane pyrophosphatase demonstrated by non‐hydrolyzable pyrophosphate analogsстатьяИсследовательская статья
Статья опубликована в высокорейтинговом журнале
Информация о цитировании статьи получена из
Scopus
Статья опубликована в журнале из списка Web of Science и/или Scopus
Дата последнего поиска статьи во внешних источниках: 23 сентября 2021 г.
Аннотация:С помощью усовершенствованного метода измерения активности исследовано ингибирование К+-зависимой Н+-транспортирующей мембранной пирофосфатазы (мРРазы) из Desulfitobacterium hafniensee тремя негидролизуемыми аналогами пирофофосфата (имидодифосфатом и С-замещенными бисфосфонатами). Кинетические данные обнаружили отрицательную кооперативность связывания ингибиторов с двумя активными центрами и пониженную скорость превращения при наличии субстрата или ингибитора в соседней субъединице. Неэквивалентность активных центров в гидролизе пирофосфата (различие величин Км) исчезало при низкой концентрации Mg2+ (необходимого кофактора). Замена К+, второго кофактора, на Na+ увеличивала кооперативность связывания. Аналогичная неэквивалентность наблюдалась и для фермента, солюбилизированного действием детергента. Полученные данные показывают, что механизм действия мРРазы в транспорте катионов через мембрану объединяет принцип прямого сопряжения Митчелла с конформационным сопряжением.