Влияние G-квадруплексов промотора гена обратной транскриптазы теломеразы человека на функции белка MutL из системы репарации "мисматчей"

Савицкая, В.Ю.; Монахова, М.В.; Сныга, В.Г.; Кубарева, Е.А.

Авторы: Савицкая В.Ю., Монахова М.В., Сныга В.Г., Кубарева Е.А.
Сборник: Сборник тезисов 25-ой Пущинской школы-конференции молодых ученых с международным участием «БИОЛОГИЯ – НАУКА XXI ВЕКА»
Тезисы
Год издания: 2022
Место издания: ФИЦ ПНЦБИ РАН г. Пущино Московской области
Первая страница: 150
Аннотация: Возникновение онкологических заболеваний может быть вызвано повреждениями ДНК, которые в нормальной клетке устраняются с помощью различных систем репарации. Наиболее трудно репарируемые мутации в ДНК активируют апоптоз клетки, который регулируется множеством факторов, в их числе формирование G-квадруплексов в ДНК (G4). Известно, что промоторы онкогенов «обогащены» G-богатыми последовательностями,способными образовывать G4. Например, участок промотора гена обратной транскриптазы теломеразы человека (hTERT), формирующий 3 тандемных квадруплекса in vitro. Появлениеточечных мутаций в G4 данной последовательности приводит к развитию различных злокачественных опухолей, что может быть связано с нарушением узнавания этих мутаций системами репарации. Объектом изучения являлась система репарации «мисматчей» в ДНК (MMR). MutL – один из ключевых белков MMR, который вносит одноцепочечный разрыв в «дочернюю» цепь ДНК после узнавания «мисматча» другим ферментом системы. Ранее взаимодействие G4 с гомологами MutL из разных организмов изучено не было. Целью данной работы являлось исследование взаимодействия MutL c одноцепочечным G-богатым участком промотора гена hTERT, формирующим G4. В ходе работы использовали MutL и фактор процессивности ДНК-полимеразы III из N.gonorrhoeae (ngMutL и ngβ, соответственно). ngMutL обладает схожими строением и функциями с эукариотическими гомологами, что позволяет применять результаты данного исследования для MMR человека. В качестве субстратов использовали нативные и мутантные последовательности hTERT, содержащие нуклеотидные замены G228A, G250A и двойную замену G242A/G243A. Мы впервые показали, что связывание ngMutL с G4 характеризуется существенно большим сродством (с константой диссоциации 80 нМ), чем с двуцепочечной ДНК той же длины (250 нМ). Введение мутаций в G4 последовательности hTERT не оказывало существенного влияния на комплексообразование с ngMutL. Впервые проведен гидролиз линейных субстратов hTERT ngMutL и показано изменение «паттерна» расщепления посравнению с гидролизом ДНК, не содержащей G4. Показано, что ngMutL расщепляет hTERT в промежутках между G4, но не внутри квадруплексных мотивов. Тем не менее, мутации вhTERT существенным образом не влияли на функции ngMutL. Таким образом, образование G4 в промоторе hTERT может препятствовать внесению одноцепочечного разрыва белком MutL, тем самым подавляя MMR. Работа поддержана Российским научным фондом (проект № 21-14-00161).
Добавил в систему: Кубарева Елена Александровна

	ИСТИНА	Войти в систему Регистрация
	ФНКЦ РР
	Главная Поиск Статистика О проекте Помощь

ИСТИНА

ФНКЦ РР

Влияние G-квадруплексов промотора гена обратной транскриптазы теломеразы человека на функции белка MutL из системы репарации "мисматчей"тезисы доклада Тезисы

Прикрепленные файлы