|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ФНКЦ РР |
||
Preparation and properties of mutant tobacco peroxidase with additional tryptophan residuesстатья
Дата последнего поиска статьи во внешних источниках: 28 мая 2015 г.
- Авторы: Poloznikov A.A., Savitsky P.A., Hushpuliyan D.M., Chubar T.A., Gazaryan I.G., Tishkov V.I.
- Журнал: Moscow University Chemistry Bulletin
- Том: 61
- Номер: 1
- Год издания: 2006
- Издательство: Allerton Press Inc.
- Местоположение издательства: United States
- Первая страница: 7
- Последняя страница: 12
- Аннотация: Методом полимеразной цепной реакции получены мутантные формы пероксидазы табака (ТОР) Gln116Trp и Leu157Trp. Экспрессия этих мутантов была осуществлена путем клонирования в вектор pET40b и культивированием в штамме E. coli BL21(DE3) Codon Plus. Уровень экспрессии апобелка пероксидазы табака в выбран- ном штамме в обоих случаях составил более 40% общего белка. Процедура рефол- динга мутантных форм была проведена на основе известной методики рефолдинга рекомбинантной пероксидазы табака дикого типа. Выход реактивации мутантных форм пероксидазы табака составляет 3–9%, удельная активность по АБТС – 2000– 3000 ед. активности на 1 мг белка. Изучены зависимости скорости окисления АБТС перекисью водорода от концентрации субстратов. Показано, что данная реакция, катализируемая мутантными формами, протекает по механизму типа “пинг-понг”, однако удельная активность по различным субстратам у Gln116Trp и Leu157Trp серь- езно различается. Таким образом, можно сделать предположение, что остатки трип- тофана выступают в роли элемента в цепи передачи заряда между активным цент- ром фермента и субстратом.
- Добавил в систему: Хушпульян Дмитрий Михайлович