Аннотация:Пост-трансляционные модификации белков включают ацетилирование, сукцинилиро- вание и глутарилирование лизиновых остатков. Для данных модификаций нужны соответ- ствующие ацил-КоА, которые образуются в реакциях, катализируемых полиферментны- ми комплексами пируватдегидрогеназы (ПДГ), 2-оксоглутаратдегидрогеназы (ОГДГ) и 2- оксоадипатдегидрогеназны (ОАДГ) при участии дифосфорилированного тиамина (ТДФ). Деацилирование метаболических белков катализируют НАД+-зависимые деацилазы, вклю- чающие сиртуин 3 (митохондриальная деацетилаза) и сиртуин 5 (удаляет отрицательно заряженные ацилы). Целью данной работы было проанализировать изменения перечис- ленных компонентов системы ацилирования белков мозга при введении животным оксити- амина (ОТ), образующего in vivo дифосфат ОТ (ОТДФ), который является ингибитором ТДФ-зависимых ферментов.Внутрибрюшинное введение ОТ проводили ежедневно, по 1,5 мг/кг в течение 30 дней. Ак- тивности дегидрогеназных комплексов в гомогенатах коры мозга крыс измеряли по флу- оресценции НАДН в присутствии и без ТДФ. Иммуноблотинг проводили с антителами ThermoFisher PA5-24028 (ОАДГ), PA5-62626 (ОГДГ-подобный), PA5-28195 (ОГДГ), CST 3205 (ПДГ) 9814 (ацетил-лизин), 5490 (сиртуин 3), 8782 (сиртуин 5) и PTM Biolabs PTM- 1151 (глутарил-лизин), PTM-401 (сукцинил-лизин), в разведении 1:400 для анти-ОАДГ, 1:1000 для анти-ОГДГ-подобных, 1:3000 для анти-сиртуин 3 и 1:2000 для всех остальных антител.Хроническое введение ОТ не изменяло содержания ТДФ в гомогенатах мозга крыс. При этом не изменялись активности и активация ТДФ ОАДГ и ПДГ, уровни глутарилирова- ния и ацетилирования белков мозга, уровни экспрессии сиртуинов 5 и 3. Тем не менее, в системе глутарилирования белков мозга обработанных ОТ животных наблюдали рост уровня экспрессии изоформы ОАДГ 75 кДа. В отличие от компонентов систем ацетилиро- вания и глутарилирования, система сукцинилирования белков мозга после введения ОТ показала сопряженные изменения ТДФ-зависимой регуляции ОГДК и сукцинилирования белков. Так, при одинаковом уровне активности ОГДК в присутствии ТДФ значимое коли- чество апофермента ОГДК (43 +/-20 %, р=0.0401) детектировалось лишь в контрольной группе. Рост уровня эндогенного холофермента ОГДГ в мозге обработанных ОТ живот- ных сопровождался ростом уровня сукцинилирования полосы с кажущейся молекулярной массой (50 кДа), близкой массе дигидролипоилсукцинилтрансферазы (48 кДа) - компонента ОГДГ комплекса, подвергающегося автосукцинилированию [1].Таким образом, хроническое воздействие низкой дозы ОТ на животных увеличивает сукцинилирование белков мозга 50 кДа одновременно с ростом насыщения ОГДК ТДФ. Вто же время изменения глутарилирования, ацетилирования и ТДФ-зависимой регуляции ОАДК и ПДК при введении ОТ не детектируются.Работа выполнена при поддержке гранта РФФИ No20-54-7804.