Аннотация:Существующие вакцины против вируса клещевого энцефалита (ВКЭ) доказали свою эффективность. Тем не менее, необходимость ревакцинаций, возможность аллергических реакций, высокая стоимость, регистрация случаев заболевания среди вакцинированных вызывают необходимость разработки более безопасной и эффективной вакцины.
Мы изучили иммуногенность препарата, содержащего домен III белка Е оболочки ВКЭ как антиген. В качестве адъюванта был использован декстран и синтетические CpG олигонуклеотиды.
Для оценки вариабельности домена III белка Е были проанализированы 386 доступных последовательностей, полученных через БД GenBank. Результаты подтвердили, что домен III белка Е имеет три позиции (313, 317 и 331), аминокислотные остатки в которых различаются для генетических типов ВКЭ (Сибирского, Европейского и Дальневосточного). Поэтому в состав препарата были включены три основных варианта последовательности домена III.
Плазмидные конструкции, содержащие последовательность домена III белка Е трех генетических типов, были получены и экспрессированы в E.coli. Антигенная структура очищенных белков подтверждена с помощью ИФА с использованием моноклональных антител к белку Е (“ВекторВКЭ-Антиген”) и сывороток больных КЭ.
В сыворотках мышей, иммунизированных препаратом на основе генно-инженерного белка, методом ИФА обнаружены антитела к штамму Софьин в концентрации 47600 ед./мл – на второй, 239000 ед./мл – на третьей, и 1635000 ед./мл на четвертой неделе после иммунизации.
Реакция нейтрализации бляшек вируса в культуре клеток СПЭВ для препарата на основе III домена генно-инженерного белка Е показала пониженные относительно вакцины сравнения “Клещ-Э-Вак” титры антител ко всем трём использованным штаммам ВКЭ (Васильченко, Софьин, Абсеттаров) на 2, 3 и 4 неделе после иммунизации.
Показано, что генно-инженерный домен III белка Е оболочки ВКЭ имеет антигенную структуру, соответствующую нативному белку. Препарат индуцирует синтез противовирусных нейтрализующих антител, специфичных в отношении определенных штаммов ВКЭ. Дальнейшая работа будет направлена на повышение иммуногенности препарата.