|
ИСТИНА |
Войти в систему Регистрация |
ФНКЦ РР |
||
Рекомбинантная DPP 4 Tenebrio molitor: получение, свойства и способность гидролизовать токсические пептиды глиадиновтезисы доклада
- Авторы: 4 Терещенкова В.Ф., Клячко Е.В., Беневоленский С.В., Белозерский М.А., Дунаевский Я.Е., Филиппова И.Ю., Элпидина Е.Н.
- Сборник: Acta Naturae. СПЕЦВЫПУСК. Международная научная конференция по биоорганической химии "XII чтения памяти академика Юрия Анатольевича Овчинникова" и VIII Российский симпозиум "Белки и пептиды"
- Тезисы
- Год издания: 2017
- Место издания: Перо Москва, ИБХ РАН, 18-22 сентября 2017
- Первая страница: 140
- Последняя страница: 140
- Аннотация: Tenebrio molitor вредитель запасов зерновых культур. Его основными пищевыми белками являются глиадины главные запасные белки семян пшеницы. В состав глиадинов входят до 30% остатков пролина и до 50% остатков глутамина. Это обусловливает наличие пролин-специфичных пептидаз (PSP) в комплексе пищеварительных ферментов T. molitor. Среди них главной пищеварительной PSP является дипептидилпептидаза 4 (DPP 4), которая входит в состав подсемейства S9B сериновых пептидаз по классификации MEROPS. DPP 4 отщепляет Xaa-Pro дипептиды от N-конца пептидной цепи любой длины, тем самым участвуя в деградации и регуляции активности пролин-содержащих белков и пептидов. В экспрессионной системе Pichia pastoris нами впервые получен рекомбинантный препарат DPP 4 T. molitor (rTmDPP4). Выход белка после очистки с использованием аффинной хроматографии на Ni2+-NTA сефарозе. составил 44 мг/л. Для очищенного препарата rTmDPP4 изучена электрофоретическая подвижность в нативных и денатурирующих условиях, последовательность фермента подтверждена масс-спектрометрически и совпадает с первичной структурой наиболее высокоэкспрессируемой пищеварительной DPP 4 T. molior. Показано, что оптимум работы фермента находится в области рН 8, интервал рН-стабильности от 6 до 9. Проведено сравнительное изучение субстратной специфичности rTmDPP4 и рекомбинантной DPP 4 человека. На примере гидролиза дипептидных субстратов общей формулы Хaa-Pro-pNA (Х = Arg, Ala, Gly; pNA - остаток пара-нитроанилина) выявлена предпочтительность rTmDPP4 к Arg-содержащему субстрату, тогда как эффективность расщепления всех исследованных субстратов рекомбинантным ферментом человека одинакова. Впервые обнаружена способность rTmDPP4 гидролизовать фрагменты токсических пептидов глиадинов. С использованием 10-членного пролин- и глутаминсодержащего пептида показана большая эффективность его гидролиза rTmDPP4, чем рекомбинантной DPP 4 человека. Работа выполнена при финансовой поддержке грантов РФФИ: 16-34-01012 мол_а, 17-34-80158 мол_эв_а, 15-04-08689-a, 15-03-06675-a; гранта Фонда содействия инновациям (FASIE): УМНИК 8874ГУ/2015 (0018984).
- Добавил в систему: Филиппова Ирина Юрьевна